家蚕C类清道夫受体BmSR-C的基因克隆、原核表达及亚细胞定位

作     者：申利 许川 张蕾 张奎 毛景欣 潘光照 李重阳 胡仁建 杨丽群 崔红娟 SHEN Li;XU Chuan;ZHANG Lei;ZHANG Kui;MAO Jing-Xin;PAN Guang-Zhao;LI Chong-Yang;HU Ren-Jian;YANG Li-Qun;CUI Hong-Juan

作者机构：西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室重庆400716 

基　　金：国家自然科学基金项目(31672496,31802142) 中国博士后科学基金(2017M620408) 重庆自然科学基金项目(cstc2016jcyjA0425) 重庆高校创新团队建设计划(CXTDX201601010) 

出 版 物：《昆虫学报》 (Acta Entomologica Sinica)

年 卷 期：2018年第61卷第10期

页      码：1132-1144页

摘      要：【目的】本研究旨在克隆与鉴定家蚕Bombyx mori C类清道夫受体基因BmSR-C,为探析其在家蚕免疫中的功能奠定基础。【方法】利用RACE技术克隆家蚕C类清道夫受体基因全长序列,并对其进行生物信息学分析。利用RT-PCR和qPCR方法对BmSR-C基因的时空表达情况进行检测。通过原核表达和Ni^+亲和层析的方法获得BmSR-C重组蛋白,免疫昆明小鼠制备抗BmSR-C多克隆抗体。利用ELISA法和Western blot分别对鼠抗BmSR-C蛋白多克隆抗体的效价和特异性进行检测。构建家蚕BmSR-C的真核表达载体,转染家蚕BmE细胞,分析该蛋白的亚细胞定位情况。【结果】克隆获得家蚕BmSR-C基因(GenBank登录号:BGIBMGA004577),其开放阅读框(ORF)全长为1 821 bp,编码606个氨基酸残基。BmSR-C具有典型的C类清道夫受体家族结构特征,主要由CCP, MAM和SO结构域以及靠近C端的单次跨膜结构域组成。进化分析结果显示鳞翅目昆虫SR-C单独聚为一支,家蚕BmSR-C与同为鳞翅目昆虫的草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda和大红斑蝶Danaus plexippus的同源蛋白亲缘关系最为接近。对BmSR-C基因的时空表达分析表明,BmSR-C在家蚕的马氏管和血细胞中高表达,而在其他组织中无明显表达;其在家蚕不同发育时期的血细胞中均有表达,且在4龄眠期的表达量达到峰值。ELISA检测结果显示,所制得抗体效价高达1∶128 000;Western blot检测结果显示,该抗体可以特异性识别重组蛋白。家蚕BmE细胞中的亚细胞定位结果表明BmSR-C主要定位于细胞膜。【结论】获得家蚕C类清道夫受体基因BmSR-C的完整cDNA序列及其表达特征;成功制备了BmSR-C的多克隆抗体,利用家蚕BmE细胞在细胞水平上分析了BmSR-C的亚细胞定位情况,推测其参与家蚕的生长发育及病原微生物入侵的免疫反应,为进一步研究BmSR-C的生物学功能奠定了基础。

主 题 词：家蚕 BmSR-C 表达分析 原核表达 亚细胞定位 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 071010[071010] 07[理学] 

核心收录：

D　O　I：10.16380/j.kcxb.2018.10.002

馆 藏 号：203395228...