虾肝肠胞虫实时荧光RAA快速检测方法的建立

作     者：黄纪徽 吴山楠 王丹云 张亮亮 陈平亚 程奇 张建勋 

作者机构：海南出入境检验检疫局海口570311 杭州众测生物科技有限公司杭州310000 

基　　金：海南省重点研发项目(ZDYF2017063) 海南省自然科学基金项目(317292) 海南出入境检验检疫局科研项目(HICIQKJ201701) 

出 版 物：《养殖与饲料》 (Animals Breeding and Feed)

年 卷 期：2018年第17卷第11期

页      码：13-16页

摘      要：为了早期快速诊断近些年流行于国内的虾肝肠胞虫,根据GenBank中公布的虾肝肠胞虫EHP-SSU rDNA序列比对分析,在SSU基因内确定了一段156 bp的特异性较强的片段作为靶序列,设计并合成引物和探针,经过优化重组酶介导的核酸技术(Recombinase-aid-amplification,RAA)反应条件,建立快速检测虾肝肠胞虫的RAA恒温荧光检测方法。在RAA进行到24个循环反应时可以检测到的质粒最小浓度是10 copies/μL,相当于10个病毒粒子。利用该方法,从天然感染EHP的虾肝胰腺组织DNA中可以检测出片段,而健康的虾和感染了传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)、对虾白斑综合症病毒(WSSV)和虾虹彩病毒(SIV)的组织则没有扩增条带。试验表明,本研究建立的RAA恒温荧光检测方法具有快速、成本低、特异性好、准确性高的特点,为大范围早期病害的快速检测提供了新方法。

主 题 词：虾肝肠胞虫 RAA检测 SSU-rDNA序列 

学科分类：0906[农学-水产类] 09[农学] 

D　O　I：10.13300/j.cnki.cn42-1648/s.2018.11.004

馆 藏 号：203395291...