单核细胞乙型肝炎病毒cccDNA检测方法及应用价值

作     者：许春海 李兆申 代俊英 朱海洋 于健武 吕淑兰 XU Chun-hai;DAI Jun-ying;ZHU Hai-yang;YU Jian-wu;LV Shu-lan

作者机构：哈尔滨医科大学第二附属医院150086 解放军第二军医大学长海医院 

基　　金：黑龙江省自然科学基金资助(D200644) 

出 版 物：《中华实验和临床病毒学杂志》 (Chinese Journal of Experimental and Clinical Virology)

年 卷 期：2011年第25卷第4期

页      码：307-309页

摘      要：目的 建立检测HBV共价闭合环状DNA（ cccDNA）的巢式-荧光定量PCR法，检测外周血单核细胞（ PBMC）及骨髓单核细胞（MMNC）中cccDNA。方法 根据HBV cccDNA与松弛结构DNA（rcDNA）结构上的差异，设计2对跨缺口的特异性引物及下游的特异性TaqMan探针。根据Mung Bean Nuclease对rcDNA与cccDNA作用的不同，使cccDNA扩增而使rcDNA降解，分别用外引物及内引物进行PCR反应，再用荧光探针进行实时荧光定量PCR，根据阳性参照物，计算出检测标本定量值。结果 成功建立了HBV cccDNA巢式-荧光定量PCR的检测方法，线性范围为5.0× 10２～3.9×107拷贝/ml。用上述方法检测25例慢乙肝及肝硬化血清HBV DNA阳性患者外周血单核细胞中cccDNA，7例骨髓单核细胞中cccDNA，21例健康献血者外周血单核细胞中cccDNA，骨髓标本中有3例cccDNA阳性，25例外周血标本中有9例cccDNA阳性。结论 巢式-荧光定量PCR法可检测乙肝患者PBMC及MMNC中的HBVcccDNA含量。PBMC及MMNC中可检测到HBVcccDNA.

主 题 词：肝炎病毒 乙型 DNA 聚合酶链反应 单核细胞 

学科分类：1004[医学-公共卫生预防医学类] 100401[100401] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1003-9279.2011.04.023

馆 藏 号：203395678...