刚地弓形虫致密颗粒蛋白GRA7基因的重组、表达及鉴定

作     者：张成芳 李瑾 张海国 魏庆宽 王卫艳 肖婷 徐超 贾凤菊 黄炳成 

作者机构：山东省医学科学院 山东省寄生虫病防治研究所山东济宁272033 济南大学 山东省医学科学院医学与生命科学学院 山东省济宁市第一人民医院 

基　　金：山东省自然科学基金项目(No.2009C03083) 山东省医药卫生科技计划项目(No.2011HW049) 

出 版 物：《中国病原生物学杂志》 (Journal of Pathogen Biology)

年 卷 期：2014年第9卷第3期

页      码：245-248页

摘      要：目的构建弓形虫致密颗粒蛋白7(GRA7)基因重组质粒并在大肠埃希菌中进行表达。方法根据GRA7基因序列设计合成引物,用PCR方法从弓形虫基因组DNA中扩增GRA7基因片段,再克隆到pGEX-4T载体中,重组质粒经酶切、PCR鉴定并测序;重组质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导表达,表达产物经SDS-PAGE分析并纯化,Western blot分析其反应原性。结果 GRA7基因PCR产物大小约为714bp,与预期相符;重组质粒经酶切及PCR鉴定构建成功,测序结果与已知序列吻合;重组质粒转化菌经IPTG诱导后表达的GRA7融合蛋白分子质量单位约为53ku,该蛋白可被His标签抗体识别。结论成功重组了弓形虫GRA7基因,表达蛋白具有反应原性,为弓形虫诊断抗原试剂盒的制备奠定了基础。

主 题 词：弓形虫 致密颗粒蛋白7 融合蛋白 蛋白纯化 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.13350/j.cjpb.140312

馆 藏 号：203396920...