西尔斯山羊草(Aegilops searsii)α-醇溶蛋白编码基因的克隆及原核表达

作     者：刘国娟 马信 尹华燕 孙鑫 杜旭烨 王宏伟 李安飞 陈呈涛 孔令让 

作者机构：山东农业大学农学院/作物生物学国家重点实验室山东泰安271018 山东省新泰市天宝镇农业技术推广站山东新泰271200 

基　　金：国家转基因专项"优质转基因小麦新品种培育(2011ZX08002004-003) 

出 版 物：《山东农业大学学报（自然科学版）》 (Journal of Shandong Agricultural University：Natural Science Edition)

年 卷 期：2015年第46卷第3期

页      码：321-325页

摘      要：醇溶蛋白是小麦加工品质的重要影响因素,主要决定面团的粘性和延展性。根据酸性条件下迁移率的不同,可将醇溶蛋白分为α-,β-,γ-,ω-醇溶蛋白。α-醇溶蛋白占贮藏蛋白的15%～30%,是含量最丰富的一类贮藏蛋白,同时,α-醇溶蛋白中含有一些致敏性的毒性多肽。克隆西尔斯山羊草α-醇溶蛋白基因,并进行序列分析,通过构建原核表达载体,使其在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白,并通过切胶纯化法,获得纯度较高的目的蛋白。根据α-醇溶蛋白基因编码区保守序列设计引物,通过PCR扩增克隆得到α-醇溶蛋白基因并进行序列分析。将目的基因KC421089连到表达载体p EASY-E1上,在大肠杆菌BL21（DE3）中经IPTG诱导表达,获得表达的融合蛋白。通过切胶纯化法,获得纯度较高的目的蛋白。从小麦近缘植物西尔斯山羊草（Aegilops searsii）中首次克隆了7个α-醇溶蛋白编码基因,它们的编码区长度分布在849～954 bp之间,可编码282～317个氨基酸。通过与已发表的其它物种的α-醇溶蛋白氨基酸序列进行多重比对分析,发现这些基因都具有α-醇溶蛋白编码基因典型的结构特点,同时还存在着碱基的缺失、插入以及SNPs。在克隆目的基因的基础上,本研究还通过大肠杆菌体外表达和切胶纯化方法,获得了纯度较高的目的蛋白,实现了该基因的表达。克隆了7个α-醇溶蛋白基因序列,登录号为KC421089的基因可在原核系统中成功表达,并通过切胶纯化法获得目的蛋白,为进一步利用西尔斯山羊草改良小麦加工品质奠定了基础。

主 题 词：α-醇溶蛋白 西尔斯山羊草 序列分析 原核表达 

学科分类：09[农学] 0901[农学-植物生产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1000-2324.2015.03.001

馆 藏 号：203397525...