针对人STAT1基因的RNA干扰有效靶点的设计与筛选

作     者：丁治国 何蓓 陈晓珩 李会龙 高翔 张韬 王鑫 李乃卿 

作者机构：北京中医药大学东直门医院东区外科北京101121 北京中医药大学第三附属医院医务处北京100029 北京中医药大学东直门医院外科北京100700 

基　　金：国家自然科学基金(81001524) 北京市中医药科技项目(QN2013-17) 

出 版 物：《中国现代普通外科进展》 (Chinese Journal of Current Advances in General Surgery)

年 卷 期：2015年第18卷第12期

页      码：925-928页

摘      要：目的:设计并筛选针对人STAT1基因有效的RNA干扰靶点。方法:根据人STAT1基因序列,设计3个干扰序列,将oligo退火成双链并连接穿梭载体pLKO-1-EGFP-puro-shRNA,构建shRNA慢病毒载体质粒,并转化至感受态细胞DH5a,进行测序验证。在脂质体介导下转染293T细胞,包装生产慢病毒。慢病毒载体转染人肝癌细胞MHCC97L的STAT1过表达瘤株(MHCC97L-stat1),用Real-timePCR检测干扰效果。结果:测序证实3个STAT1基因RNAi病毒载体质粒构建成功;慢病毒载体经293T细胞包装成功;3个慢病毒载体转染人肝癌细胞MHCC97L-stat1瘤株48h后,STAT1基因在mRNA水平表达均受到抑制,其中MHCC9-L-stat1-shRNA-1序列效果最佳,对STAT1基因表达的干扰效率可达81.4%。结论:成功构建并筛选了人STAT1基因RNAi慢病毒载体及有效靶点,为进一步深入研究STAT1基因与抗肿瘤药物药效关系奠定基础。

主 题 词：STAT1基因 慢病毒载体 RNA干扰 MHCC97L细胞 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1009-9905.2015.12.001

馆 藏 号：203397765...