猪链球菌2型主要毒力因子三重荧光定量PCR检测方法的建立

作     者：王蓉蓉 孙卫东 蒋蔚 刘迎春 陈永军 薛俊欣 张梦 王权 WANG Rong-rong;SUN Wei-dong;JIANG Wei;LIU Ying-chun;CHEN Yong-jun;XUE Jun-xin;ZHANG Meng;WANG Quan

作者机构：中国农业科学院上海兽医研究所，上海200241 南京农业大学动物医学院，南京210095 南京农业大学动物医学院南京210095 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 

基　　金：公益性行业(农业)科研专项(201303045) 

出 版 物：《中国动物传染病学报》 (Chinese Journal of Veterinary Parasitology)

年 卷 期：2014年第22卷第6期

页      码：25-31页

摘      要：根据GenBank中猪链球菌2型三种毒力因子CP2SJ、MRP、EF基因序列，利用Primer Express 3.0软件分别设计3对特异性的引物及相应的Taqman探针。CP2SJ、MRP、EF探针5′端分别标记FAM、HEX、CY5荧光发射基团，3′端标记BHQ1淬灭荧光基团。通过优化反应体系和程序，建立了一种基于Taqman探针法的三重荧光定量PCR，可同时检测上述三种毒力基因。该方法灵敏度高，CP2SJ、MRP、EF的最低检测限分别为90、40、60拷贝数/μL的质粒；特异性强，与其他病原菌无交叉反应；重复性好，变异系数均小于3%。整个检测扩增在60 min内完成。以上结果表明本试验所建立的三重荧光定量PCR方法的敏感性、重复性及特异性均较好，可用于同时快速检测猪链球菌2型三种毒力因子。

主 题 词：猪链球菌2型 三重荧光定量PCR 毒力因子 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1674-6422.2014.06.005

馆 藏 号：203398371...