支气管败血波氏杆菌SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立

作     者：尹清清 德西措姆 罗怡琳 邬旭龙 张鹏飞 杨泽晓 姚学萍 王印 YIN Qing-qing;DEXI Cuo-mu;LUO Yi-lin;WU Xu-long;ZHANG Peng-fei;YANG Ze-xiao;YAO Xue-ping;WANG Yin

作者机构：四川农业大学动物医学院四川成都611130 动物疫病与人类健康四川省重点实验室四川成都611130 西藏昌都市左贡畜牧站西藏昌都854400 

基　　金：国家"十二五"国家科技支撑计划(2013BAD12B04) 

出 版 物：《中国预防兽医学报》 (Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine)

年 卷 期：2018年第40卷第10期

页      码：917-921页

摘      要：为建立支气管败血波氏杆菌SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法,本研究根据波氏菌属毒力基因DNT设计一对特异性引物,通过优化,确定最佳反应条件,建立了支气管败血波氏杆菌荧光定量PCR检测方法。并对其进行敏感性、特异性、重复性试验以及临床样品的检测。以支气管败血波氏杆菌标准质粒为模板,建立标准曲线结果显示:标准品浓度在1.13×10~8拷贝/μL～1.13×10~2拷贝/μL范围内具有良好的线性关系,相关数R^2=0.997;该方法的灵敏度可达1.13×10~1拷贝/μL。建立的荧光定量PCR方法与副猪嗜血杆菌、猪链球菌、金黄色葡萄球菌等12种细菌和伪狂犬病毒、猪瘟病毒等4种病毒无交叉反应,具有良好的特异性;批内变异系数(CV)均小于2%,批间变异系数均小于4%,具有良好的稳定性。对临床样品的检测结果显示该方法检测的阳性率为57.7%,与普通PCR的符合率为93.24%。本研究建立的方法可以用作支气管败血波氏杆菌感染的早期诊断、快速检测与定量分析。

主 题 词：支气管败血波氏杆菌 荧光定量PCR 皮肤坏死毒素基因 定量分析 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1008-0589.201711048

馆 藏 号：203403095...