多单位核酶对慢性粒细胞白血病细胞的增殖抑制及凋亡诱导效应研究

作     者：冯琦 孙秉中 孙凯 尚振川 王莎 王玮 赵永同 颜真 韩苇 张英起 

作者机构：第四军医大学西京医院血液内科西安710033 西京医院肝胆外科 第四军医大学西京医院生物技术中心西安710033 

基　　金：国家自然科学基金资助项目 (3 9670 3 3 0 ) 

出 版 物：《中华肿瘤杂志》 (Chinese Journal of Oncology)

年 卷 期：2002年第24卷第5期

页      码：435-439页

摘      要：目的　探讨多单位核酶体外净化慢性粒细胞白血病 (慢粒 )骨髓的可能性 ,研究多单位核酶的体外切割活性及对慢粒细胞恶性表型的逆转作用。方法　针对慢粒发病中起重要作用的bcr abl融合基因 ,在融合位点两侧 4 4碱基范围内设计、合成 3个核酶 ,其中 2个切割位点位于bcr基因 ,1个位于abl基因。通过基因重组构建多单位核酶体外转录载体及逆转录病毒表达载体 ,鉴定其体外切割活性。将多单位核酶逆转录病毒表达载体转染K5 6 2细胞 ,应用MTT、3 H TdR掺入、RT PCR、斑点杂交、流式细胞仪、透射及扫描电镜等方法 ,检测多单位核酶对慢粒细胞增殖活性及细胞超微结构、细胞周期、凋亡等的影响。结果　多单位核酶的体外切割活性为 70 .8% ,逆转录病毒载体转染慢粒K5 6 2细胞系后 ,细胞DNA合成及细胞增殖受到明显抑制 ,转染后 96h抑制率达 5 0 %左右。多单位核酶转染细胞后能够有效切割细胞RNA ,使转染细胞RNA减少 10 0 0倍左右。流式细胞仪检测显示多单位核酶转染 72h后 ,18.4 %的细胞发生凋亡 ,大多数细胞被阻滞于G期 ,分裂期 (S期 )细胞数减少约 4 1.9%。透射、扫描电镜见转染细胞出现核固缩、凋亡小体等细胞凋亡的特异性表现。结论　多单位核酶不仅具有较高的体外切割活性 ,而且其逆转录病毒载体能够有效转染慢?

主 题 词：慢性粒细胞白血病 bcr-abl基因 核酶 细胞凋亡 基因治疗 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/j.issn:0253-3766.2002.05.005

馆 藏 号：203404536...