鹅细小病毒主要结构蛋白基因的扩增、克隆与原核表达载体的构建

作     者：马君 章金钢 李雪梅 向华 马凤龙 赵玉军 殷震 MA Jun;ZHANG Jin-gang;LI Xue-mei;XIANG Hua;MA Feng-long;ZHAO Yu-yun;YIN Zhen

作者机构：解放军军需大学动物科技系吉林长春130062 沈阳农业大学畜牧兽医学院辽宁沈阳110161 

基　　金：:国家自然科学基金!资助项目 ( 39870 5 5 7) 教育部和总后勤部回国人员启动基金! ( 98H0 2 6 )资助项目 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2000年第20卷第6期

页      码：554-557页

摘      要：根据已发表的鹅细小病毒 ( GPV)核苷酸序列设计并合成了 1对引物 ,对 GPV主要结构蛋白 VP2和VP3基因进行扩增。所获得的 PCR产物与预期片段大小相符 ,约 1 .8kb。将该片段直接与真核表达 p CR3.1T载体连接 ,转化入感受态大肠杆菌 TOP1 0 F′中增殖。在对所提质粒进行快速鉴定、PCR扩增以及 Bam H 酶切线性化初步鉴定的基础上 ,经限制性内切酶 Sca 和 Eco R 分别酶切进行正反向鉴定 ,获得了 3个正向插入的克隆 ( PVPA)和 2个反向插入的克隆 ( PVPB)。将正向插入的克隆 PVPA1与原核表达载体 p ET-2 8b( + )分别用 Bam H 和 Xho 双酶切后 ,回收目的片段进行定向连接 ,并转化入感受态大肠杆菌 DH5α中。对所获得的重组质粒分别经 Sca 、Eco R 、Bam H / Xho 酶切 ,证实含有目的基因 ,且基因插入方向正确 ,成功地构建了含有 GPV主要结构蛋白基因的原核表达载体 。

主 题 词：鹅细小病毒 结构蛋白基因 原核表达载体 扩增 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1005-4545.2000.06.010

馆 藏 号：203404649...