猪伪狂犬病病毒PCR-LFD检测方法的建立及应用

作     者：张莉 任卫科 李秀丽 路超 王利丽 郑丽 池晶晶 田向学 韩伟 鄢明华 ZHANG Li;REN Wei-ke;LI Xiu-li;LU Chao;WANG Li-li;ZHENG Li;CHI Jing-jing;TIAN Xiang-xue;HAN Wei;YAN Ming-hua

作者机构：农业部兽用药物与诊断技术天津科学观测实验站天津300381 天津市畜牧兽医研究所天津300381 

基　　金：天津市科技计划支撑项目(18YFZCNC01110) 天津市农业科技成果转化与推广项目(201601070) 天津市生猪产业技术体系项目(ITTPRS2017003) 中国农业科学院重大平台推进计划(Y2017PT50) 

出 版 物：《动物医学进展》 (Progress In Veterinary Medicine)

年 卷 期：2018年第39卷第11期

页      码：35-40页

摘      要：旨在将PCR技术与可视化的横向流动试纸条(lateral flow dipstick,LFD)相结合,建立猪伪狂犬病病毒野毒株的PCR-LFD快速检测技术。依据猪伪狂犬病病毒gE基因保守区域设计2条特异性引物和对应的特异性探针,其中下游引物和探针分别标记了荧光素(FITC)和生物素(Biotin)。通过对PCR退火温度、引物浓度、探针杂交温度的筛选,确定PCR-LFD方法的最佳反应条件,并对其敏感性、特异性和重复性进行检测。结果显示,所建立的检测方法能够特异性的检测出猪伪狂犬病病毒野毒株,与猪伪狂犬病病毒Bartha-K61株、6种对照病毒和3种对照细菌均无交叉反应,其最低检测限为100TCID50/100μL。该方法对同批次和不同批次猪伪狂犬病病毒DNA分别进行5次重复检测,结果完全一致。该方法对50份临床样品进行检测,PCR-LFD方法和病毒分离培养法检测出16份阳性样品,常规PCR检测出14份阳性样品,PCR-LFD方法的敏感性高于PCR,但两者间差异不显著P>0.05。以上结果表明,所建立的方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,且不需要琼脂糖凝胶电泳可直接判读结果,适合养殖场、基层实验室的现场检测。

主 题 词：猪伪狂犬病病毒 聚合酶链反应 横向流动试纸条 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16437/j.cnki.1007-5038.2018.11.006

馆 藏 号：203407093...