肿瘤相关抗原基因OVA66特异的RNA干扰对肿瘤细胞生物学特性的影响

作     者：李美星 王颖 王树军 张惠珍 周光炎 尤强 葛海良 LI Mei-xing;WANG Ying;WANG Shu-jun;ZHANG Hui-zhen;CHOU Kuang-yen;YOU Qiang;GE Hai-liang

作者机构：上海交通大学医学院上海市免疫学研究所上海200025 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30371598) 上海市高校科技发展基金资助项目(03BX20) 

出 版 物：《现代免疫学》 (Current Immunology)

年 卷 期：2005年第25卷第6期

页      码：450-455页

摘      要：构建OVA66基因的特异小干扰RNA表达载体,转染HeLa细胞,分析对该基因表达和肿瘤生物学特性的影响。以RT-PCR、Westernblot方法检测OVA66基因在多种肿瘤细胞系的表达谱。利用计算机辅助设计和合成针对OVA66的特异小干扰RNA的DNA片段,定向克隆于特定的干扰载体(pSUPER)。利用脂质体法将重组载体转染于OVA66高表达细胞系HeLa,筛选得到shRNA-OVA66稳定表达细胞。采用Real-timePCR检测目的基因的表达;FACS、Westernblot方法分析目的蛋白的表达。MTT、3H-TdR掺入等方法检测干扰OVA66基因表达后对HeLa细胞增殖和凋亡的影响。双酶切鉴定得到针对OVA66基因特异的shRNA表达载体(pSUPER-shRNA-OVA66),并经序列分析证实。经检测pSUPER-shRNA-OVA66稳定表达的HeLa细胞(shRNA-OVA66)中目的基因mRNA水平降低;OVA66蛋白表达受到抑制,表明设计的靶片段对目的基因有显著的抑制效果。并显示shRNA-OVA66细胞DNA合成下降;细胞周期分析表明阻断OVA66基因表达可抑制shRNA-OVA66细胞增殖能力,并引发细胞凋亡。OVA66特异的shRNA表达载体构建成功,阻断OVA66基因表达可抑制细胞增殖,促使细胞凋亡,为OVA66蛋白肿瘤生物学功能与肿瘤发生、发展的研究奠定基础。

主 题 词：OVA66 肿瘤相关基因 干扰shRNA 凋亡 增殖 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 071010[071010] 1002[医学-临床医学类] 081704[081704] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-轻工类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1001-2478.2005.06.003

馆 藏 号：203408940...