RNA干扰阻断OX40/OX40L共刺激通路对CD4＋CD25＋T调节细胞的影响

作     者：高鹏骥 冷希圣 张栋 李涛 朱继业 

作者机构：北京大学人民医院肝胆外科中心北京大学器官移植中心100044 美国匹兹堡大学Thomas E.Starzl器官移植研究所 

基　　金：高等学校博士学科点专项科研基金资助项目(20070001710) 

出 版 物：《中华普通外科杂志》 (Chinese Journal of General Surgery)

年 卷 期：2010年第25卷第10期

页      码：822-825页

摘      要：目的 探讨慢病毒介导的RNA干扰技术诱导小鼠树突状细胞OX40L基因沉默对调节性T细胞的影响. 方法 设计针对小鼠OX40L基因的RNA于扰序列,通过外源筛靶筛选出干扰效果最佳的序列.以293T为包装细胞,制备含OX40L的siRNA序列的慢病毒载体OX40L-RNAi-LV和阴性对照载体NC-GFP-LV.采用磁式分选器分离培养骨髓来源的小鼠树突状细胞（DCs）,以MOI为25进行转染,分别将转染OX40L-RNAi-LV（实验组）、转染NC-GFP-LV（阴性对照组）和未转染（空白对照组）的DCs与磁式分选器分选得到的CD4^＋CD25^＋T调节细胞共培养,6 d后通过流式细胞仪检测T调节细胞的增殖和凋亡情况. 结果外源筛靶筛选出干扰效果最佳的RNA干扰序列（靶序列为GCTCATACAAGAATGAGTA）,OX40L蛋白表达的抑制率为73.1%.感染复数为25时,慢病毒载体感染DCs的效率为86.4%.DCs与CD4^＋CD25^＋T调节细胞共培养后,实验组的凋亡细胞比例为8.7%,显著低于阴性对照组（20.1%）和空白对照组（19.8%）,F=244.22,P=0.000;而增殖细胞前体频率为38.3%,明显高于阴性对照组（24.5%）和空白对照组（22.9%）,F=95.40,P=0.000.结论 小鼠OX40L的siRNA慢病毒载体可以有效降低树突状细胞OX40L的表达,对体外培养的CD4＋CD25＋T调节细胞具有显著地促进增殖、减少凋亡的作用.

主 题 词：RNA干扰 树突细胞 T淋巴细胞,细胞毒性 小鼠 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100210[100210] 10[医学] 

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1007-631X.2010.10.013

馆 藏 号：203410712...