发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒实时荧光RT—PCR检测方法的建立

作     者：吕燕宁 王全意 窦相峰 王小梅 庞星火 LU Yan-ning;WANG Quan-yi;DOU Xiang-feng;WANG Xiao-mei;PANG Xing-huo

作者机构：北京市疾病预防控制中心传染病地方病控制所100013 

基　　金：基金项目:国家高技术研究发展计划(863计划)(项目编号:2008AA02ZAl6) 

出 版 物：《国际病毒学杂志》 (International Journal of Virology)

年 卷 期：2011年第18卷第4期

页      码：111-115页

摘      要：目的建立新型发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒的TaqMan探针实时荧光RT—PCR检测方法并进行评估，为发热伴血小板减少综合征监测中新型布尼亚病毒感染的排查提供实验室检测依据。方法利用新型布尼亚病毒S片段基因的特异性序列设计引物和探针，探针5’端标记FAM，3’端标记TAMRA，优化反应体系与反应条件，并对不同浓度含有目的基因的质粒以及在发热伴血小板减少综合征监测中收集的32份样本和流行性出血热病毒阳性样本进行核酸检测，验证该方法的特异性、敏感性和重复性。结果该方法所检测的32份可疑病例的临床样本中，3份为阳性，与国家疾病预防控制中心下发的试剂以及商品化试剂盒的检测结果一致；流行性出血热病毒检测结果为阴性。对目的基因的检测灵敏度达4×102拷贝／ml；重复性实验中，变异系数为0．125％-0．28％。全部检测过程从样本的核酸提取至检测完成仅需2．5h左右。结论本文建立的TaqMan探针实时荧光***法是一种检测新型发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒的特异、快速、敏感的方法。该方法的建立将有益于今后开展发热伴血小板减少综合征监测以及应急临床样本中新型布尼亚病毒感染的排查和快速检测。

主 题 词：布尼亚病毒 发热伴血小板减少综合征 实时荧光RT—PCR 

学科分类：1004[医学-公共卫生预防医学类] 100401[100401] 10[医学] 

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1673-4092.2011.04.004

馆 藏 号：203411073...