应用直接重组酶聚合酶扩增技术快速检测烟曲霉菌

作     者：王秋平 黄恩奇 杨银梅 钟志敏 陈斌 WANG Qiu-ping;HUANG En-qi;YANG Yin-mei;ZHONG Zhi-min;CHEN Bin

作者机构：南华大学附属第一医院检验科湖南衡阳421001 广州医科大学附属广州市第一人民医院检验科广东广州510180 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(81201163) 广东省医学科研基金资助项目(A2018122) 广州市科学研究计划基金资助项目(201804010333) 

出 版 物：《中华医院感染学杂志》 (Chinese Journal of Nosocomiology)

年 卷 期：2018年第28卷第24期

页      码：3734-3737页

摘      要：目的通过建立重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA)直接检测标准烟曲霉菌株的方法,探讨其无需样本前处理的可行性。方法针对标准烟曲霉核酸序列保守区域设计RPA扩增引物,使用100、10^(-1)、10^(-2)、10^(-3)、10^(-4)、10^(-5)麦氏浊度的标准烟曲霉菌液作为无样本前处理组进行直接RPA扩增;同时,分别采用柱式法、磁珠法、氯化苄法提取烟曲霉菌DNA作为样本前处理对照组并进行RPA扩增,最后,应用2%琼脂糖凝胶电泳对产物进行分析。结果标准烟曲霉菌的100、10^(-1)、10^(-2)及10^(-3)麦氏浊度均可于39℃30min内扩增出目的条带;三种提取方法结果分别为:柱氏法(13.8±0.83)ng/μl,磁珠法(11.5±2.25)ng/μl,氯化苄法(64.9±1.31)ng/μl,三种方法均能扩增出目的条带,其中氯化苄法产出率较高(64.9±1.31)ng/μl。结论 RPA可以扩增出未经前处理(核酸提取)的样本,具有快速简便的优点,为检测烟曲霉菌提供了一个有效的工具。

主 题 词：重组酶聚合酶扩增技术 烟曲霉菌 DNA提取 快速检测 

学科分类：100208[100208] 1002[医学-临床医学类] 10[医学] 

D　O　I：10.11816/CN.NI.2018-181530

馆 藏 号：203416505...