利用CRISPR/Cas9技术构建FARS2基因定点突变的大鼠模型

作     者：李晨浩 车凤玉 王国霞 杨行 李辉 张勇 杨颖 Li Chenhao;Che Fengyu;Wang Guoxia;Yang Hang;Li Hui;Zhang Yong;Yang Ying

作者机构：空军军医大学基础医学院人体解剖与组织胚胎学教研室西安710032 西安市儿童医院儿科疾病研究所西安710003 

基　　金：国家自然科学基金资助(81600993) 陕西省自然科学基金(2016JM3005) 

出 版 物：《神经解剖学杂志》 (Chinese Journal of Neuroanatomy)

年 卷 期：2018年第34卷第6期

页      码：737-741页

摘      要：目的:利用CRISPR/Cas9技术构建FARS2基因特定位点突变的大鼠模型。方法:根据FARS2基因序列,设计FARS2基因特异性的单链向导RNA(sgRNA)引物序列并克隆入pU57-T7-GDNA载体。利用T7RNA聚合酶体外转录sgRNA和Cas9mRNA。将体外转录的sgRNA/Cas9mRNA显微注射入SD大鼠受精卵,通过PCR和基因测序对FARS2基因特定位点突变进行检测和鉴定。繁育FARS2基因敲除大鼠并分析后代突变情况。结果:基因测序证实成功构建表达sgRNA载体,成功将sgRNA和Cas9mRNA直接注射入大鼠受精卵。基因测序鉴定获得5只F0代初建鼠。DNA测序结果证实5号大鼠(ID#5)发生了gac>tac突变,该突变并可遗传至子代大鼠。结论:利用CRISPR/Cas9技术成功制备FARS2基因定点突变的大鼠模型,为进一步研究FARS2的功能奠定了基础。

主 题 词：CRISPR/Cas9 FARS2 sgRNA 遗传性痉挛性截瘫 基因敲除大鼠 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100204[100204] 10[医学] 

D　O　I：10.16557/J.CNKI.1000-7547.2018.06.015

馆 藏 号：203416519...