SPAG6基因RNAi慢病毒载体的构建及其对SKM-1细胞凋亡的影响

作     者：杨碧慧 张玉琳 王利 罗小华 陈礼平 杨泽松 刘林 Yang Bihui;Zhang Yulin;Wang Li;Luo Xiaohua;Chen Liping;Yang Zesong;Liu Lin

作者机构：重庆医科大学附属第一医院血液内科重庆400016 

基　　金：重庆市自然科学基金重点项目(CSTC2013jj B0145)~~ 

出 版 物：《第三军医大学学报》 (Journal of Third Military Medical University)

年 卷 期：2015年第37卷第5期

页      码：474-479页

摘      要：目的构建SPAG6-shRNA慢病毒载体靶向沉默SPAG6基因,探讨SPAG6基因沉默对人骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)细胞株SKM-1细胞增殖及凋亡的影响。方法设计并构建3条针对SPAG6基因的shRNA质粒表达载体,共转染293T细胞后得到可表达SPAG6基因RNAi的慢病毒载体。转染SKM-1细胞,利用流式细胞术检测转染效率,qRT-PCR及Western blot验证SPAG6基因干扰效果,筛选最佳靶点。CCK-8法检测SPAG6基因沉默对SKM-1细胞生长的影响,流式细胞术检测细胞凋亡。结果成功构建SPAG6-shRNA慢病毒载体,流式细胞术检测转染效率均在60%以上。qRT-PCR及Western blot检测结果显示SPAG6-shRNA3慢病毒载体敲除效率最高,为最佳靶点。SPAG6基因干扰后,干扰组SKM-1细胞的增殖明显受抑,抑制率为(60.18±0.37)%,与阴性对照组相比差别有统计学意义(P<0.05)。干扰组SKM-1细胞凋亡率为(16.32±5.80)%,显著高于阴性对照组[(4.28±0.88)%,P=0.024]及空白对照组[(3.08±1.50)%,P=0.019]。结论 SPAG6-shRNA慢病毒载体能有效降低SPAG6基因表达水平,抑制SKM-1细胞增殖并促进其凋亡。

主 题 词：SPAG6基因 慢病毒 RNA干扰 骨髓增殖异常综合征 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 071007[071007] 

核心收录：

D　O　I：10.16016/j.1000-5404.201408199

馆 藏 号：203417384...