慢病毒载体介导半乳凝素-3-shRNA沉默基因对肿瘤细胞的影响

作     者：王明栋 王洪 马文斌 史彦芳 王任直 WANG Ming-Dong;WANG Hong;MA Wen-Bin;SHI Yan-Fang;WANG Ren-Zhi

作者机构：河北大学附属医院神经外科河北保定071000 北京协和医院神经外科北京100730 

基　　金：河北省科学技术研究与发展课题基金(052761123) 

出 版 物：《第四军医大学学报》 (Journal of the Fourth Military Medical University)

年 卷 期：2008年第29卷第12期

页      码：1111-1114页

摘      要：目的:构建干扰半乳凝素-3(Galectin-3)的重组U6慢病毒质粒,体外评价和观察内源性小RNA干扰效果及对细胞增殖和凋亡的影响.方法:根据siRNA设计原则,设计合成短发夹DNA,用于体内转录合成干扰Galectin-3编码序列的发夹RNA.连接,筛选,酶切,鉴定pGCL-GFP/U6 Gal-3shRNA-1;以含无关序列发夹结构的质粒载体为对照,感染乳腺癌细胞系,采用RT-PCR和Western Blot检测mRNA和蛋白表达水平与对照组的差别;MTT法和流式细胞检测其对细胞增殖、凋亡的干扰情况.结果:测序证实重组质粒构建成功,体外试验表明,Galectin-3的mRNA和蛋白表达均一致降低,转染组为(0.028%),阴性对照组为(0.617%),空白对照组为(0.992%),转染组mRNA干扰效率达95%(P<0.05);Galectin-3蛋白表达明显下调,与阴性对照组和空白对照组相比较,差异有统计学意义(P<0.05).MTT检测结果转染组为(0.40±3.69)%,阴性对照组(0.71±0.16)%;转染组和阴性对照组间差异均有统计学意义(P<0.05).细胞凋亡百分率为68.78%.结论:慢病毒介导的Galectin-3-shRNA成功在体外敲减了肿瘤细胞的目的蛋白,影响了肿瘤的发生与发展.

主 题 词：慢病毒载体 半乳糖凝集素-3 shRNA 基因沉默 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3321/j.issn:1000-2790.2008.12.016

馆 藏 号：203417386...