金黄色葡萄球菌重组表皮剥脱毒素A的原核表达

作     者：王毅 肖异珠 杨致邦 欧阳莹 李咏梅 罗晓燕 Wang Yi;Xiao Yizhu;Yang Zhibang;Ouyang Ying;Li Yongmei;Luo Xiaoyan

作者机构：重庆医科大学基础医学院免疫学教研室重庆400016 重庆医科大学附属儿童医院皮肤科重庆400014 重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室重庆400016 

出 版 物：《重庆医科大学学报》 (Journal of Chongqing Medical University)

年 卷 期：2015年第40卷第3期

页      码：436-440页

摘      要：目的:通过基因工程技术获取重组表皮剥脱毒素A(recombine exfoliative toxin A,r ETA),为深入研究表皮剥脱毒素的致病机制提供实验材料。方法:根据Gen Bank公布的ETA基因序列设计引物,从金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,***)基因组中扩增ETA基因,插入原核表达载体p QE30,构建重组质粒p QE30-ETA。将p QE30-ETA转化表达菌*** M15,优化诱导表达条件,SDS-PAGE分析重组蛋白的表达,Western blot鉴定。重组蛋白经Ni2+-NTA树脂纯化后,注入BALB/C小鼠皮下,观察皮肤病理改变,鉴定重组蛋白的生物学活性。结果:重组质粒p QE30-ETA序列分析显示插入的基因片段全长927 bp,与基因文库中的ETA序列完全吻合。SDS-PAGE分析显示表达产物相对分子量约为27 k D,在IPTG终浓度0.1 mmol/L,诱导时间4 h,可得到最大表达量的可溶性蛋白,约为20%。Western blot显示与***产生的ETA蛋白在同一位置,重组蛋白经Ni2+-NTA树脂纯化后蛋白纯度达90%以上,注射重组蛋白的小鼠表皮内出现水疱和裂隙。结论:成功构建了重组质粒p QE30-ETA,表达了具有生物学活性的重组***表皮剥脱毒素A。

主 题 词：金黄色葡萄球菌 葡萄球菌性烫伤样皮肤综合征 表皮剥脱毒素A 原核表达 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13406/j.cnki.cyxb.000441

馆 藏 号：203420036...