人参SQE基因干扰载体的构建及转化

作     者：于彦婷 任丽 孙春玉 蒋世翠 王义 张美萍 YU Yan-ting;REN Li;SUN Chun-yu;JIANG Shi-cui;WANG Yi;ZHANG Mei-ping

作者机构：吉林农业大学生命科学学院细胞工程实验室长春130118 

出 版 物：《中国医药生物技术》 (Chinese Medicinal Biotechnology)

年 卷 期：2011年第6卷第2期

页      码：121-126页

摘      要：目的探讨SQE基因对人参皂苷合成的影响。方法根据SQE基因保守区序列,分别设计合成其正反义片段引物行RT-PCR扩增,扩增产物分别与pMD18-T质粒连接后转化*** DH5α,获得的pMD18-T-SQE-S、pMD18-T-SQE-A重组质粒经双酶切后,将正反义片段与质粒pMHZ112反向连接,转化*** DH5α,构建SQE基因RNAi双元表达载体pMHZ112-SQE。电击法将鉴定正确的重组质粒pMHZ112-SQE转化农杆菌GV3101感受态细胞,再利用农杆菌介导法转化人参愈伤组织,提取抗性人参愈伤组织细胞基因组DNA,进行PCR检测并计算抗性愈伤转化率;同时提取人参皂苷,采用HPLC方法检测抗性人参愈伤组织的皂苷含量。结果结果显示总RNA较完整无降解,质量较好;RT-PCR扩增产物正反义片段大小与预期一致;重组质粒pMD18-T-SQE-S、pMD18-T-SQE-A和pMHZ112-SQE分别经双酶切进行测序鉴定,结果表明目的基因已插入重组质粒且连接方向正确。人参愈伤组织细胞基因组DNA的PCR检测结果显示1个菌落经2对引物扩增结果均呈阳性,证明构建的pMHZ112-SQE重组质粒已成功整合入植物基因组中,其抗性愈伤转化率为1%。转化pMHZ112-SQE重组质粒后,人参抗性愈伤组织中单体皂苷Rg1、Re、Rc含量明显下降,Rb1略有升高,实验组与对照组(转化空质粒)间Rg1、Re、Rb1、Rc的含量差异显著(均P<0.05);而2组均未检测出Rb2和Rd。结论成功构建了SQE基因RNAi双元表达载体,通过转化人参愈伤组织抑制SQE基因的表达,可以调控人参皂苷含量发生相应的改变。

主 题 词：人参 基因 药物载体 皂苷类 

学科分类：1008[医学-中药学类] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2011.02.008

馆 藏 号：203420189...