采用RNAscope原位杂交技术检测PRRSV与PCV2的共感染

作     者：王晓捷 崔蒙蒙 常天明 王刚 李江南 何希君 刘长明 熊涛 翁长江 WANG Xiao-jie;CUI Meng-meng;CHANG Tian-ming;WANG Gang;LI Jiang-nan;HE Xi-jun;XIONG Tao;WENG Chang-jiang

作者机构：长江大学生命科学学院湖北荆州434025 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 

基　　金：黑龙江省自然科学基金(C2016061) 中国农业科学院基本科研业务费专项(1610302017010) 

出 版 物：《中国预防兽医学报》 (Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine)

年 卷 期：2018年第40卷第11期

页      码：1015-1019页

摘      要：RNAscope原位杂交是一种检测细胞内靶标RNA的新型检测技术,为验证该技术能否用于检测猪繁殖与呼吸综合征病毒-猪圆环病毒2型(PRRSV-PCV2)的共感染,本研究针对PRRSV N基因和PCV2 Rep基因序列,分别设计两组特异性探针,利用RNAscope原位杂交技术分别检测了PRRSV和PCV2单独感染或PRRSV-PCV2共感染的猪肺泡巨噬细胞(PAMs)以及一例PRRSV-PCV2共感染猪的多个组织样品,同时采用间接免疫荧光试验(IFA)以及RNAscope原位杂交联合IFA对PRRSV和PCV2单独感染或PRRSV-PCV2共感染的PAMs进行检测。结果显示,通过RNAscope原位杂交技术检测PRRSV N基因和PCV2 Rep基因检测到同一PAM中的PRRSV和PCV2共感染;通过IFA检测PRRSV Nsp9蛋白和PCV2 Cap蛋白检测到同一PAM中的PRRSV和PCV2共感染;两种方法联合使用结果显示,通过RNAscope探针检测PRRSV N基因和IFA方法检测PCV2 Cap蛋白,或者通过RNAscope探针检测PCV2 Rep基因同时用IFA方法检测PRRSV Nsp9蛋白来检测同一PAM中的PRRSV和PCV2共感染。同时,RNAscope原位杂交技术能够在PRRSV-PCV2共感染猪的肺脏、脾脏和淋巴结的组织切片中检测到PRRSV和PCV2共感染的细胞。以上结果表明RNAscope原位杂交技术适用于PRRSV-PCV2共感染的细胞和组织样品的检测,为研究PRRSV-PCV2共感染及协同致病机制奠定了基础。

主 题 词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪圆环病毒2型 RNAscope 共感染 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/J.ISSN.1008—0589.201802033

馆 藏 号：203424096...