稳定转染HSP72奶牛乳腺上皮细胞系建立与表达鉴定

作     者：于文慧 展西振 丰艳妮 曹荣峰 姜忠玲 李华涛 田文儒 YU Wenhui;ZHAN Xizhen;FENG Yanni;CAO Rongfeng;JIANG Zhongling;LI Huatao;TIAN Wenru

作者机构：青岛农业大学动物医学院山东青岛266109 

基　　金：国家自然科学基金项目(31502138 31572590 31772815) 山东省高校科技计划项目(J15LF03) 青岛农业大学研究生创新计划项目(QYC201710) 山东省现代农业产业技术体系创新团队项目(SDAIT-09-03) 

出 版 物：《华北农学报》 (Acta Agriculturae Boreali-Sinica)

年 卷 期：2018年第33卷第6期

页      码：103-107页

摘      要：为了构建HSP72慢病毒表达载体,建立稳定表达HSP72的牛乳腺上皮细胞系。以牛HSP72基因序列为模板,设计并合成引物,PCR扩增目的基因,连接到慢病毒表达质粒中,用包装获得的慢病毒感染牛乳腺上皮细胞,经一定浓度的嘌呤霉素筛选,Hochest33342法对细胞核定位,倒置荧光显微镜下观察转染效率,用免疫组化和Western Blot方法验证感染细胞是否稳定表达HSP72。结果显示,携带HSP72基因的慢病毒滴度约为1. 0×109TU/m L;确定嘌呤霉素的最佳筛选浓度为2μg/m L;牛HSP72慢病毒感染细胞表达HSP72,感染的奶牛乳腺上皮细胞在倒置荧光显微镜下可看到绿色荧光,转染效率可达90%以上;免疫组化结果表明,正常细胞和空载体感染细胞,HSP72呈现低表达,转染携带HSP72目的基因载体细胞,HSP72高表达,呈现颜色较深的棕色; Western Blot方法检测证实与正常转染细胞相比,慢病毒空载体转染的奶牛乳腺上皮细胞HSP72表达稍有降低,但无统计学差异,而携带HSP72基因的慢病毒载体转染的细胞HSP72呈现高表达,且差异极显著(P <0. 01),与慢病毒空载体转染的奶牛乳腺上皮细胞相比,携带HSP72基因的慢病毒载体转染的细胞HSP72呈现高表达,且差异极显著(P <0. 01)。成功建立稳定表达HSP72的牛乳腺上皮细胞系,可为研究奶牛乳腺炎分子调控机制以及抗性分子药物筛选提供新的理论依据和工作基础。

主 题 词：HSP72 稳定转染 慢病毒载体 奶牛乳腺上皮细胞 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 0905[农学-林学类] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.7668/hbnxb.2018.06.014

馆 藏 号：203424217...