慢病毒介导的稳定表达let-7a的睾丸卵黄囊瘤细胞株的建立

作     者：吴大洲 周欢栋 沈德雷 郑娜 李仲荣 陈肖鸣 张浩川 Wu Dazhou;Zhou Huandong;Shen Delei;Zheng Na;Li Zhongrong;Chen Xiaoming;Zhang Haochuang

作者机构：温州医科大学附属第一医院小儿外科325000 温州医科大学附属第二医院、育英儿童医院小儿外科 

基　　金：浙江省医药卫生科技项目(2013KYAl26) 温州市科技局科研基金资助项目(Y20160101) 

出 版 物：《中华小儿外科杂志》 (Chinese Journal of Pediatric Surgery)

年 卷 期：2018年第39卷第11期

页      码：867-871页

摘      要：目的构建microRNAlet-7a重组慢病毒表达载体,建立稳定表达let-7a的睾丸卵黄囊瘤细胞株(TYST-1),并探索let-7a过表达后对睾丸卵黄囊瘤(TYST)细胞增殖的影响。方法根据miRBase数据库let-7a的序列,设计合适的引物序列,利用聚合酶链反应(PCR)钓取目的基因片段,经过扩增、酶切后,与慢病毒载体GV309连接。转化DH5α感受态细胞,阳性克隆进行PCR及测序鉴定。293T细胞中包装慢病毒,利用荧光法测定病毒滴度。将构建好的let-7a慢病毒载体感染睾丸卵黄囊瘤(TYST)细胞,经嘌呤霉素筛选并扩大培养后得到稳定克隆株,建立稳定表达let-7a的TYST-1。用Quantitative real-time PCR(qRT-PCR)检测let-7a表达水平,用Cell Counting Kit-8(CCK-8)检测let-7a过表达后对TYST细胞增殖的影响。结果构建的let-7a慢病毒载体经质粒酶切和测序鉴定正确;let-7a慢病毒感染组细胞内let-7a水平比阴性病毒对照组和空白对照组分别提高3.O倍和3.8倍(P

主 题 词：微RNAs 内胚层窦瘤 慢病毒载体 细胞增殖 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/CMA.J.ISSN.0253-3006.2018.11.014

馆 藏 号：203424280...