B族链球菌C5a肽酶功能活性区域的分段表达

作     者：岳丽琴 沈叙庄 周育森 林粱 杨永弘 

作者机构：北京儿童医院微生物及免疫室北京100045 军事医学科学院流行病学研究所北京100071 北京华大蛋白质研发中心北京101318 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30371487) 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2006年第19卷第2期

页      码：116-119页

摘      要：目的表达B族链球菌C5a肽酶蛋白功能活性区域,为进一步研究及开发疫苗奠定基础。方法设计引物,从GBSⅡ型标准株的基因组DNA中扩增出含有C5a肽酶蛋白不同功能区域基因的4个目的片段,分别插入T载体,再经酶切后,插入原核表达载体PET32a,进行融合表达。对表达蛋白进行免疫原性检测,并通过镍柱大量纯化。结果成功构建4个目的片段的PET表达质粒。经SDS-PAGE检测表达的融合蛋白相对分子质量分别为80000、78000、70000和36000。蛋白质谱分析证实,表达的4个蛋白为B族链球菌C5a肽酶蛋白的可能性分数分别为82、152、113和79。免疫印迹证实均能与特异性抗C5a肽酶蛋白的抗体反应,纯化后的蛋白SDS-PAGE纯度达90%。结论已成功地表达了可溶性C5a肽酶蛋白4个功能活性区域,为蛋白免疫表位和毒力机制的研究以及亚单位蛋白疫苗的制备奠定了基础。

主 题 词：B族链球菌 C5a肽酶 基因表达 功能活性区域 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13200/j.cjb.2006.02.17.yuelq.004

馆 藏 号：203424447...