鹦鹉热嗜衣原体蛋白酶样活性因子免疫优势区基因重组蛋白的诊断应用研究

作     者：王绍胜 吴移谋 陈丽丽 曾焱华 刘良专 WANG Shao-sheng;WU Yi-mou;CHEN Li-li;ZENG Yan-hua;LIU Liang-zhuan

作者机构：南华大学病原生物研究所衡阳421001 江苏省太湖干部疗养院214086 

基　　金：传染病防治重大专项课题项目(2008ZXl0004-001) 国家自然科学基金项目(81001318) 

出 版 物：《中华微生物学和免疫学杂志》 (Chinese Journal of Microbiology and Immunology)

年 卷 期：2011年第31卷第9期

页      码：781-786页

摘      要：目的检测鹦鹉热嗜衣原体（Chlamydophila psittaci，c加）蛋白酶样活性因子（cMamydial protease-likeactivity factor，CPAF）免疫优势区基因在*** B121中高效表达的产物在印5感染诊断中的应用，为建立印s感染的快速诊断奠定实验基础。方法利用生物信息学软件筛选出CpsCPAF免疫优势区基因序列（CPAFm，A196～A450），设计特异性引物，PCR扩增目的基因，将其克隆入pGEX6p-2载体后转化***121，利用IPTG诱导表达重组蛋白，Westernblot鉴定重组蛋白。以纯化的重组蛋白作为包被抗原，建立血清学诊断的间接ELISA法；同时用商品ELISA试剂盒与建立的间接ELISA法检测180份可疑Cps感染的病鸭血清标本，将检测结果进一步用Westernblot方法验证。结果构建原核重组质粒pGEX6p-2／Cps CPAFm，表达相对分子质量约为54×10^3的目的蛋白产物。以纯化的重组蛋白为包被抗原建立间接ELISA法检测Cps参考血清，其阴、阳性符合率均为100％；与肺炎嗜衣原体（***-moniae，印n）、沙眼衣原体（***，Ct）无交叉反应。对180份可疑病鸭血清标本进行检测，与商品Birds Chlamydia Psittaci IgG ELISA试剂盒比较，以Westernblot方法作对照，自建的ELISA法符合率均为100％，Birds Chlamydia Psittaci IgG ELISA Kit符合率为77．5％～95．0％。结论以Cps CPAF免疫优势区（A196～A450）作为诊断抗原，建立血清学诊断的间接ELISA法具有较好的临床诊断价值。

主 题 词：鹦鹉热嗜衣原体 衣原体蛋白酶样活性因子 免疫活性 血清学诊断 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2011.09.004

馆 藏 号：203426532...