靶向性沉默DNMTl基因对胰腺癌细胞DNA甲基化的影响

作     者：徐岷 张尤历 高道键 张玉琦 李兆申 高军 杜奕奇 龚燕芳 吴洪玉 高飞 XU Min;ZHANG You-li;GAO Dao-jian;ZHANG Yu-qi;LI Zhao-shen;GAO Jun;DU Yi-qi;GONG Yan-fang;WU Hong-yu;GAO Fei

作者机构：江苏大学附属医院消化科江苏镇江212001 第二军医大学长海医院消化科 沈阳军区总医院内窥镜科 

基　　金：江苏省自然科学基金(BK2009210) 江苏省卫生厅科研项目(H200836) 辽宁省博士科研启动基金(20101131) 镇江市科研计划项目(SH2009012) 

出 版 物：《中华胰腺病杂志》 (Chinese Journal of Pancreatology)

年 卷 期：2012年第12卷第4期

页      码：234-237页

摘      要：目的观察DNA甲基转移酶1（DNMTl）基因沉默后对人胰腺癌PaTu8988细胞的DNMT活性及hMLH·1基因CpG岛DNA甲基化状态的影响。方法由美国Ambion公司设计合成DNMTIsiRNA和阴性对照siRNA，分别用15、30nmol／L的浓度转染胰腺癌PaTu8988细胞，以未转染组细胞作为对照。应用实时PCR和蛋白质印迹法检测DNMTlmRNA和蛋白的表达；用DNMT活性检测试剂盒检测其活性；用亚硫酸氢盐测序PCR（BSP）法检测hMLH-1基因CpG岛的甲基化状态；实时PCR法检测hMLH-1mRNA的表达。结果转染48h后，DNMTlsiRNAl5、30nmol／L组细胞DNMTlmRNA表达量分别为0．573±0．026和0．143-3-0．044，显著低于对照组的1．020±0．217及阴性siRNA15、30nmol／L组的0．900±0．475和0．938±0．327（P值均〈0．05）；DNMTlsiRNA组的DNMTl蛋白表达亦低于对照组和阴性siRNA组。DNMTlsiRNAl5、30nmol／L组细胞DNMT活性分别为0．364±0．124和0．250±0．072，明显低于对照组的0．931±0．065及阴性siRNA15、30nmol／L组的0．665±0．055和0．472±0．040。DNMT活性与DNMTlmRNA表达呈正相关（r=0．69，P〈0．01）。DNMTlRNA干扰后导致hMLH-1基因CpG位点的8个甲基化减少到1个甲基化。结论DNMTlsiRNA能特异性抑制胰腺癌PaTu8988细胞DNMTl基因的表达，明显抑制DNMT的活性，并引起hMLH-1基因CpG岛去甲基化。

主 题 词：DNA甲基转移酶1 RNA 小分子干扰 胰腺肿瘤 甲基化 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2012.04.006

馆 藏 号：203427036...