转基因油菜W-4T-DNA旁侧序列分析与事件特异性检测(英文)

作     者：陈松 申爱娟 周晓婴 戚存扣 Song CHEN;Aijuan SHEN;Xiaoying ZHOU;Cunkou QI

作者机构：国家油料作物改良中心南京油菜分中心江苏南京210014 农业部长江下游棉花与油菜重点实验室江苏南京210014 南京农业大学农学院江苏南京210095 

基　　金：Supported by Key Agricultural Technology Research and Development Program of Jiangsu Province(BE2009304) Fund for National Rapeseed Research System(CARS13)~~ 

出 版 物：《Agricultural Science & Technology》 (农业科学与技术（英文版）)

年 卷 期：2014年第15卷第7期

页      码：1089-1094页

摘      要：W-4是通过农杆菌介导法将fad2基因的反向重复序列表达框转入甘蓝型油菜Westar后获得的转基因高油酸油菜品系。为建立W-4的转基因事件特异性PCR检测技术,应用温度不对称PCR(TAIL-PCR)扩增获得转基因油菜W-4的T-DNA插入位点的左、右旁侧序列。其中右边界旁侧序列长度为290 bp,其碱基组成G+C含量为31.27%、A+T含量为68.73%;左边界旁侧序列长度为365 bp,其碱基组成G+C含量为32.6%、A+T含量为67.4%,表明该T-DNA整合在富含AT区。序列比对结果发现,该转基因事件中,T-DNA左边界序列完全整合到油菜基因组中,仅有1个碱基由G转换成了A。而右边界则缺失了包括RB border在内的62个碱基。结果表明:转基因高油酸油菜T-DNA的整合是一次无载体序列的整合。依据左、右边界旁侧序列和转基因载体的T-DNA左右边界序列设计了2对特异性引物TLF/TLR和TRF/TRR,能从W-4基因组DNA中扩增出大小分别为485和405 bp的预期产物,而在其他转基因油菜、非转基因油菜的基因组DNA和空白对照中均无特异性扩增产物,据此建立了W-4的转基因事件特异性PCR检测技术。应用该检测技术可以从含有0.1%W-4基因组DNA的混合样品中扩增出特异产物,检测灵敏度达0.1%。可对W-4的转基因事件进行特异性检测。

主 题 词：转基因油菜 旁侧序列 事件特异性检测 

学科分类：09[农学] 0901[农学-植物生产类] 

D　O　I：10.16175/j.cnki.1009-4229.2014.07.020

馆 藏 号：203428034...