绿色荧光蛋白基因标记野生型生防枯草芽孢杆菌的研究

作     者：姚震声 陈中义 陈志谊 郑小波 张杰 黄大昉 YAO Zhen Sheng 1,2,3 \ CHEN Zhong Yi 1 \ CHEN Zhi Yi 2 \ ZHENG Xiao Bo 3 ZHANG Jie 1 HUANG Da Fang 1 1(State Key Lab for Biology of Plant Diseases and Insect Pests, Institute of Plant Protection Chinese Academy of Agricultural Science,Beijing 100094, China) 2(Academy of Agricultural Science of Jiangsu Province,Nanjing 210014, China) 3(Department of Plant Protection, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, China)

作者机构：中国农业科学院植物保护研究所 江苏省农业科学院植物保护研究所南京210014 南京农业大学植物保护学系南京210095 江苏省农业科学院植物保护研究所 南京农业大学植物保护学系 

基　　金："8 63"计划课题 ( 2 0 0 1AA2 12 3 0 1) "973"计划课题 ( 2 0 0 1CB10 90 0 5 ) 植物病虫害生物学国家重点实验室开放课题~~ 

出 版 物：《生物工程学报》 (Chinese Journal of Biotechnology)

年 卷 期：2003年第19卷第5期

页      码：551-555,T002页

摘      要：根据绿色荧光蛋白基因和枯草芽孢杆菌木糖诱导型启动子PxylR序列 ,分别设计两对特异引物primersPxyF R和primersgfpF R ,扩增获得了完整的启动子PxylR和gfp基因序列。进一步以上述产物混合物为模板 ,以primerPxyF primergfpR做引物进行重迭PCR ,获得了PxylR gfp重组翻译融合表达盒。经SphⅠ和KpnⅠ完全酶切后 ,将PxylR gfp表达盒分别插入大肠杆菌_苏云金芽孢杆菌穿梭载体pHT315和大肠杆菌 枯草芽孢杆菌穿梭载体pRP2 2。相应的重组表达质粒pGFP315和pGFP2 2转化枯草芽孢杆菌感受态细胞。前者在标准菌株 16 8中得到良好发光表型 ,后者则在标准菌株 16 8和野生目标菌株B916中均得到良好的发光表型。室内平板抑菌实验结果显示B916生防效果与出发菌株没有明显差异 ,遗传稳定性研究表明连续稀释培养约 175代后 ,工程菌株稳定性为 94 % ,质粒丢失频率低于 3 5× 10 - 4 代。

主 题 词：绿色荧光蛋白基因 重迭PcR 枯草芽孢杆菌 生物防治 基因工程 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 0831[工学-公安技术类] 1001[医学-基础医学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 0904[农学-动物医学类] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:1000-3061.2003.05.008

馆 藏 号：203429121...