树鼩干细胞生长因子的原核表达、纯化及免疫原性

作     者：龙琼 郝嘉茂 徐盟 毕研伟 肖红剑 李智华 闫玲梅 丁晨 李育中 姚月婷 寸韡 LONG Qiong;HAO Jia-mao;XU Meng;BI Yan-wei;XIAO Hong-jian;LI Zhi-hua;YAN Ling-mei;DING Chen;LI Yu-zhong;YAO Yue-ting;CUN Wei

作者机构：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 昆明医科大学海源学院云南昆明650106 吉林省万通药业四川分公司四川宜宾644000 

基　　金：北京协和医学院协和青年基金资助(3332015147) 云南省重点新产品开发计划(2015BC010) 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2019年第32卷第1期

页      码：20-24,28页

摘      要：目的原核表达、纯化树鼩干细胞生长因子(stem cell factor,SCF),并检测其免疫原性。方法根据GenBank预测的树鼩SCF基因序列设计引物,PCR扩增SCF基因,克隆至原核表达载体p ET-30a(+)中,构建重组表达质粒pET-30a(+)-SCF,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的融合蛋白经Ni柱纯化后,免疫家兔,Western blot和ELISA法检测其免疫原性,并检测SCF在树鼩不同组织中的分布情况。结果重组表达质粒pET-30a(+)-SCF经酶切及测序证实构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为34 500,表达量约占菌体总蛋白的35. 6%,以包涵体形式存在;纯化后的重组蛋白纯度达90%以上,可与兔抗人SCF多克隆抗体特异性结合,且免疫原性良好,抗血清效价为1∶256 000。在鼻、气管、肺、脾、肾、食管中能检测到SCF的分布。结论在大肠埃希菌中高效表达了重组SCF蛋白,纯化复性后具有良好的免疫原性。

主 题 词：树鼩 干细胞生长因子 原核表达 纯化 免疫原性 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 0831[工学-公安技术类] 1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0703[理学-化学类] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.13200/j.cnki.cjb.002433

馆 藏 号：203430104...