人生长激素基因的克隆、高效表达及纯化

作     者：刘晓宏 粟永萍 李淑蓉 王蒙 艾国平 王军平 程天民 

作者机构：第三军医大学全军复合伤研究所重庆400038 

出 版 物：《中华实验外科杂志》 (Chinese Journal of Experimental Surgery)

年 卷 期：2003年第20卷第8期

页      码：733-735页

摘      要：目的研究人生长激素(hGH)基因在原核中的高效表达、纯化及鉴定.方法设计带双酶切位点引物,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法获得hGH cDNA片段,并亚克隆入pUC19质粒中进行DNA序列测定.将hGH cDNA片段克隆入原核表达载体pBV220中进行表达.表达产物经7mol/L盐酸胍裂解变性、复性、层析等一系列纯化研究,纯化产物经SDS-PAGE电泳,高压液相色谱法(HPLC)纯度分析及活性测定,并通过N末端氨基酸序列测定鉴定表达产物.结果 RT-PCR扩增所得片段大小与预期值一致.pBV220-hGH表达产物经SDS-PAGE电泳显示,分子量为22×103与预计结果相符.rhGH表达量占菌体总蛋白量的40%.表达产物纯化后,纯度达97%以上,比活性大于3.0IU/mg.纯化产物经N末端15个氨基酸测定验证,为重组人生长激素.结论成功构建了pBV220-hGH原核表达质粒,并在大肠杆菌中高效表达,表达产物经纯化得到纯度≥97%的rhGH,比活性大于3.0 IU/mg.该研究为rhGH的中试生产奠定了基础.

主 题 词：人生长激素 基因克隆 基因表达 纯化 鉴定 

学科分类：1001[医学-基础医学] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/j.issn:1001-9030.2003.08.027

馆 藏 号：203435363...