靶向XIAP的shRNA重组质粒的构建

作     者：吴小力 张鹏 张琼 姚津剑 林菊生 Xiao-Li Wu;Peng Zhang;Qiong Zhang;Jin-Jian Yao;Ju-Sheng Lin

作者机构：华中科技大学同济医学院附属同济医院消化内科湖北省武汉市430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院普通外科湖北省武汉市430030 

出 版 物：《世界华人消化杂志》 (World Chinese Journal of Digestology)

年 卷 期：2007年第15卷第23期

页      码：2482-2486页

摘      要：目的:设计以X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)为靶向的shRNA,构建携带此shRNA的重组质粒,检测其抑制XIAP表达的效应,筛选RNA干扰作用最强的shRNA片段.方法:设计4对针对XIAP基因不同位点的shRNA片段,构建携带此shRNA片段的真核表达载体psiRNA-Hhneo-XIAP,通过脂质体介导的方法将重组质粒转染到肝癌细胞株HepG2细胞中.采用逆转录酶链式反应(RT-PCR)及蛋白印迹(Western blotting)方法检测XIAP的mRNA及蛋白表达情况,比较转染前后其表达差异,以判断各shRNA的干扰效应.结果:成功构建含shRNA片段的重组质粒.经质粒测序证实,插入的DNA片段的序列与设计序列完全一致.重组质粒转染HepG2细胞后,XIAP基因的mRNA水平及蛋白表达水平明显下调,其中以1号重组质粒效应最强.shRNA作用48h后,对HepG2细胞中XIAP mRNA和蛋白的抑制率与3,4号重组质粒相比,均具有显著性差异(mRNA:94.5% vs 81.5%,82.6%,均PX染色体连锁凋亡抑制蛋白;;短发夹状RNA;;肝癌;;逆转录聚合酶链式反应;;

主 题 词：X染色体连锁凋亡抑制蛋白 短发夹状RNA 肝癌 逆转录聚合酶链式反应 免疫蛋白印迹 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1009-3079.2007.23.004

馆 藏 号：203440315...