EGFR靶向shRNA真核表达载体的构建与鉴定

作     者：潘泽政 杨小红 贺慧为 张晓春 李金生 PAN Ze-zheng;YANG Xiao-hong;HE Hui-wei;ZHANG Xiao-chun;LI Jin-sheng

作者机构：南昌大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室 江西省人民医院ICU南昌330006 南昌大学第二附属医院分子中心 

基　　金：国家自然科学基金(30360035) 

出 版 物：《江西医学院学报》 (Acta Academiae Medicinae Jiangxi)

年 卷 期：2007年第47卷第5期

页      码：5-7,42页

摘      要：目的构建干扰表皮生长因子受体(EGFR)的pSilencerTM-EGFR表达质粒,转染入非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞株,为观察对EGFR的沉默效应奠定基础。方法①根据人类EGFR的mRNA序列,设计4条干扰片段,以pSilencerTM2.1-U6-hygro质粒为载体,构建shRNA重组体,转化入DH5α大肠杆菌,提取质粒,进行酶切和测序鉴定;②采用脂质体2000分别转染人类非小细胞肺癌细胞株A549,用潮霉素(Hygromycin B)筛选阳性克隆。结果①经酶切及测序鉴定,成功构建了针对EGFR的4种重组干扰质粒,分别命名为pSilencerTM-EGFRⅠ、pSi-lencerTM-EGFRⅡ、pSilencerTM-EGFRⅢ和pSilencerTM-EGFRⅣ;②成功转染A549细胞,经筛选后得到稳定表达的细胞克隆。结论利用RNAi技术原理成功构建针对EGFR的shRNA重组质粒,并转染入A549细胞。

主 题 词：表皮生长因子受体 RNA干扰 短发荚RNA 转染 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1000-2294.2007.05.002

馆 藏 号：203440346...