中度嗜盐菌Bacillus ***1-05α-淀粉酶基因的克隆和原核表达

作     者：康壮丽 郝凤霞 胡文革 赵建朋 KANG Zhuang-li;HAO Feng-xia;HU Wen-ge;ZHAO Jian-peng

作者机构：石河子大学生命科学学院新疆石河子832003 

出 版 物：《食品科学》 (Food Science)

年 卷 期：2009年第30卷第9期

页      码：168-171页

摘      要：本实验室从新疆盐湖分离得到一株产α-淀粉酶中度嗜盐菌Bacillus ***1-05,根据已报道的α-淀粉酶基因(α-AMY)序列的保守区域设计引物,从中度嗜盐菌Bacillus ***1-05基因组中扩增出α-淀粉酶基因片段,将α-淀粉酶基因纯化后克隆到pGM-T载体上测序,结果表明α-淀粉酶基因片段长约1500bp,与地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis的α-淀粉酶基因序列的同源性为95%,两种序列具有一定的同源性。按正确的阅读框架将α-淀粉酶基因片段定向克隆到表达载体pET-32a上,将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳表明,α-淀粉酶基因能在大肠杆菌BL21中成功表达,确定表达蛋白的相对分子量为61kD左右,与理论推导的分子量相一致;构建的大肠杆菌工程菌,所产生的α-淀粉酶是包涵体,通过超声波粉碎仪粉碎后,测α-淀粉酶酶活为原菌的1.8倍。

主 题 词：中度嗜盐菌 α-淀粉酶 克隆 表达 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 071001[071001] 07[理学] 

核心收录：

D　O　I：10.7506/spkx1002-6630-200909040

馆 藏 号：203440969...