LRIG3基因特异性siRNA腺病毒表达载体的构建与鉴定

作     者：袁晓奕 包世新 杨为民 叶章群 Yuan Xiaoyi,Bao Shixin,Yang Weimin et al Department of Urology,Tongji Hospital,Tongji Medical College,Huazhong University of Science and Technology,Wuhan 430030,China

作者机构：华中科技大学同济医学院附属同济医院泌尿外科武汉430030 

基　　金：湖北省自然科学基金资助项目(No.2004ABA205) 

出 版 物：《华中科技大学学报（医学版）》 (Acta Medicinae Universitatis Scientiae et Technologiae Huazhong)

年 卷 期：2010年第39卷第1期

页      码：18-21页

摘      要：目的构建并鉴定针对LRIG3基因的小干扰RNA(LRIG3-siRNA)腺病毒表达载体,为膀胱癌基因治疗的研究提供有效的实验工具。方法设计可形成小发夹结构的LRIG3-siRNA模板cDNA序列,克隆至缺陷型腺病毒质粒pSilencer-U6neo,构建LRIG3-siRNA表达质粒pSilencer-LRIG3。鉴定正确后,将pSilencer-LRIG3转染至HEK293细胞,包装成复制缺陷型腺病毒pAd-LRIG3。大量扩增pAd-LRIG3,氯化铯梯度离心纯化,测病毒滴度。pAd-LRIG3感染人膀胱癌细胞T24,RT-PCR法检测LRIG3 mRNA的表达。结果酶切分析、测序鉴定表明pSilencer-LRIG3构建成功,PCR分析表明pAd-LRIG3含有LRIG3-siRNA序列。pAd-LRIG3可抑制LRIG3 mRNA的表达。结论含有LRIG3-siRNA的重组腺病毒构建成功,且具有抑制LRIG3基因mRNA表达的功能。

主 题 词：LRIG3基因 RNA干扰 腺病毒载体 膀胱癌 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 100214[100214] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3870/j.issn.1672-0741.2010.01.005

馆 藏 号：203441266...