应用巢式RT-PCR扩增HA和NA基因片段并测序鉴定甲型H1N1流感病毒

作     者：陈伟烈 魏绍静 张复春 王建 唐漾波 CHEN Wei-lie;WEI Shao-jing;ZHANG Fu-chun;WANG Jian;TANG Yang-bo

作者机构：广州市第八人民医院传染病研究所510060 

出 版 物：《中华生物医学工程杂志》 (Chinese Journal of Biomedical Engineering)

年 卷 期：2010年第16卷第5期

页      码：471-475页

摘      要：目的 建立一种利用巢式RT-PCR特异扩增HA和NA基因片段并测序鉴定甲型H1N1流感病毒的技术.方法 设计两套共7条特异引物,通过巢式RT-PCR分别扩增甲型H1N1流感病毒HA和NA基因片段并测序,所得序列与人感染甲型流感病毒主要HA和NA亚型序列进行进化树分析以对结果作进一步鉴定,蛋白序列比对后分析其特征.结果 4例甲型H1N1流感患者流感病毒HA和NA基因RT-PCR扩增均分别得到442 bp和543 bp片段产物.核苷酸序列进化分析表明,该4例患者HA和NA序列分别与2009年爆发的甲型H1N1流感病毒HA及NA序列聚集在一起,与季节性H1、H2、H3、人禽流感H5亚型及季节性N1、N2、人禽流感N1亚型特异分开.蛋白序列分析表明,4例患者流感病毒HA蛋白裂解位点附近氨基酸序列均为PSIQSR↓GLF,不具有高致病性流感病毒的特性,NA蛋白第275位氨基酸为His,未出现H275Y的耐药变异.结论 本方法能特异扩增甲型H1N1流感病毒HA和NA基因片段,测序后可用于甲型H1N1流感病毒的进一步鉴定 同时,得到的序列也可用于流感病毒致病力及耐药性的分析.

主 题 词：聚合酶链反应 序列分析,DNA 流感病毒A型,H1N1亚型 HA基因 NA基因 

学科分类：1004[医学-公共卫生预防医学类] 100401[100401] 10[医学] 

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1674-1927.2010.05.017

馆 藏 号：203441742...