miRNA干扰质粒的构建及其对肝癌HepG2细胞IGF-Ⅱ表达的抑制作用

作     者：姚宁华 姚登福 钱静 董志珍 邱历伟 蔚丹丹 

作者机构：南通大学附属医院临床医学研究中心江苏省南通市226001 南通大学附属医院放疗科江苏省南通市226001 南通大学诊断学教研室江苏省南通市226001 

基　　金：江苏省自然科学基金资助项目 No.BK2008187 南通大学自然科学基金资助项目 No.09ZY013~~ 

出 版 物：《世界华人消化杂志》 (World Chinese Journal of Digestology)

年 卷 期：2011年第19卷第10期

页      码：1015-1021页

摘      要：目的:研究miRNA干扰质粒对胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)在肝细胞癌表达的抑制作用,探讨IGF-Ⅱ在肝细胞癌治疗中的价值.方法:以人IGF-Ⅱ基因序列设计并合成4条miRNA,将miRNA插入质粒构建pcDNATM6.2-GW/EmGFP miR1-4干扰载体;筛选、转染HepG2细胞,以荧光定量PCR分析靶向肝癌IGF-Ⅱ基因表达的干扰效果;以ELISA法比较转染前后IGF-Ⅱ蛋白表达水平.结果:测序证实,成功构建了真核IGF-Ⅱ干扰质粒MR-IGF-Ⅱ-1-4,将干扰质粒转染至HepG2细胞,镜下显示转染效率50%;经荧光定量PCR扩增,沉默IGF-Ⅱ基因表达效率MR-IGF-Ⅱ-1为33%、MR-IGF-Ⅱ-2为43%、MR-IGF-Ⅱ-3为0%、MR-IGF-Ⅱ-4为3%.将其中MR-IGF-Ⅱ-2转染至HepG2细胞,在转录和蛋白水平上对IGF-Ⅱ具有较高干扰效率,分别达43.0%和43.5%.结论:成功构建了人miRNA干扰质粒,他能有效抑制HepG2细胞IGF-Ⅱ的表达.

主 题 词：肝细胞癌 胰岛素样生长因子Ⅱ 微小RNA 质粒构建 基因沉默 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

馆 藏 号：203441786...