重组泛素连接酶PTB-U-box/RING的构建与表达

作     者：王秦豪 茹懿 申亮亮 李霞 药立波 WANG Qinhao;RU yi;SHEN Liangliang;LI Xia;YAO Libo

作者机构：第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室西安市710032 

基　　金：国家自然科学基金(No.30873003 No.30800492 No.30972723) 

出 版 物：《医学分子生物学杂志》 (Journal of Medical Molecular Biology)

年 卷 期：2011年第8卷第2期

页      码：100-104页

摘      要：目的 构建重组泛素连接酶PTB-U-box、PTB-RING,并克隆进入pFLAG-CMV4真核表达载体,为研究靶向降解受体型酪氨酸激酶IGF-IR,抑制肿瘤细胞生长提供基础.方法 分别设计引物,扩增接头分子IRS-1的PTB结构域以及E3泛素连接酶CHIP的U-box、Cbl的RING结构域,再利用重组PCR,将PTB分别与U-box、RING进行融合,双酶切之后将其插入真核表达载体pFLAG-CMV4,经过酶切鉴定及测序后,转染HeLa细胞,Western 印迹验证重组质粒的表达.结果 PCR结果显示PTB-U-box条带大小840 bp,PTB-RING大小为620 bp,重组质粒经酶切鉴定和测序结果正确,转染后可见融合蛋白的表达.结论 成功构建真核重组表达载体pFLAG-CMV4-PTB-U-box和 pFLAG-CMV4-PTB-RING,并且转染HeLa细胞后证实其能够正确表达.

主 题 词：重组泛素连接酶 重组质粒 基因表达与构建 

学科分类：1001[医学-基础医学] 10[医学] 

D　O　I：10.3870/j.issn.1672-8009.2011.02.002

馆 藏 号：203441787...