蛋鸡TRPV6基因的原核表达、纯化及抗体制备

作     者：郑燕玲 杨俊花 张建鹏 江莎 侯加法 

作者机构：南京农业大学动物医学院江苏南京210095 

基　　金：教育部高校博士点基金资助项目(200803070021) 国家自然科学基金资助项目(30972234) 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2012年第32卷第8期

页      码：1169-1173页

摘      要：为制备蛋鸡TRPV6蛋白多克隆抗体,根据其基因序列,设计1对特异性引物,以卵巢组织中提取的总RNA为模板,扩增蛋鸡TRPV6基因1 801～2 176nt的375bp序列,构建原核表达质粒pET-32a(+)-TRPV6;将重组质粒转化BL21(DE3),经IPTG诱导表达TRPV6融合蛋白,通过镍离子螯合柱纯化后免疫新西兰大白兔,获得兔抗鸡TRPV6多克隆抗体,分别通过酶联免疫吸附试验(ELISA)法和Western blot检测抗体的效价和抗体特异性。结果表明,试验成功构建原核表达载体pET-32a(+)-TRPV6,SDS-PAGE蛋白电泳检测发现目的蛋白大小约35 000;Western blot分析显示,表达的TRPV6融合蛋白具有良好的免疫原性,其抗体可与大肠杆菌表达的产物特异性结合;ELISA显示其抗体效价达1∶100 000。获得纯化的融合蛋白和多克隆抗体对研究TRPV6钙离子通道在蛋鸡髓质骨形成的作用机理具有重要作用。

主 题 词：鸡 TRPV6 原核表达 多克隆抗体 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 090601[090601] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 0906[农学-水产类] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.16303/j.cnki.1005-4545.2012.08.018

馆 藏 号：203442458...