HBV人工转录因子的制备及其靶向抑制HBV增强子活性研究

作     者：罗伟 蒋清虎 刘济铭 胡慧雯 温路 魏续福 刘锐 吴忠均 

作者机构：重庆医科大学附属第一医院肝胆外科重庆400016 

基　　金：国家自然科学基金(81171562) 重庆市渝中区科技计划项目(20130118) 

出 版 物：《第三军医大学学报》 (Journal of Third Military Medical University)

年 卷 期：2014年第36卷第5期

页      码：450-455页

摘      要：目的构建可靶向性识别HBV增强子的锌指蛋白人工转录因子真核表达载体,检测其在真核细胞内的表达、对细胞增殖影响及生物学活性分析。方法应用锌指蛋白(zinc finger protein,ZFP)设计工具Zinc finger tools 3.0获取人工转录因子(artificial transcription factor,ATF)结合结构域并融合抑制性效应结构域KRAB,全基因合成ATF克隆进真核表达载pcDNA3.1(+),酶切、测序来鉴定构建载体的正确性,X-tremeGENE HP转染pcDNA3.1-ATF于HepG2细胞,采用RT-PCR、免疫荧光及Western blot检测ATF mRNA与蛋白的表达情况;CCK-8检测不同浓度的ATF表达载体转染后对细胞增殖的影响;双荧光素酶报告基因检测ATF对HBV增强子序列的靶向性抑制作用。结果成功构建pcDNA3.1-ATF真核表达载体;在HepG2细胞中能够正常表达;CCK-8检测ATF对细胞增殖生长无明显的毒性作用;双荧光素酶报告基因分析ATF能靶向性结合增强子并抑制报告基因的表达。结论通过基因工程的方法构建pcDNA3.1-ATF的真核表达载体可正常表达且无明显细胞毒性作用,可靶向性识别HBV增强子并具有相应的生物学活性。

主 题 词：增强子 锌指蛋白 人工转录因子 真核表达载体 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 07[理学] 100103[100103] 071007[071007] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.16016/j.1000-5404.2014.05.002

馆 藏 号：203443106...