高粱胞质雄性不育及保持系的RAPD技术优化

作     者：范昌发 孙春昀 孙毅 王景雪 贾敬芬 何军贤 郭骁才 

作者机构：西北大学生命科学学院陕西西安710069 四川大学生命学院四川成都610064 山西省农业生物技术研究中心山西太原030031 中国科学院成都生物研究所四川成都610041 

基　　金：中国科学院生物科学与技术研究特别支持资助项目 (STZ- 1- 16 ) 山西省留学回国人员资助项目 (No.9810 15 ) 山西省财政厅科技支农资助项目 (No.980 0 3) 

出 版 物：《西北大学学报（自然科学版）》 (Journal of Northwest University（Natural Science Edition）)

年 卷 期：2002年第32卷第3期

页      码：298-302页

摘      要：以高粱细胞质雄性不育系和保持系 A1Tx6 2 3 A/B,A2 V4 A/B为材料 ,考察了 Mg2 + ,Taq酶 ,d NTP,引物 ,模板等的用量、循环参数及不同的 PCR仪对随机扩增多态性 DNA(RAPD)反应的影响。结果发现 :在 2 5 μL体系中 ,Mg Cl2 2 .0 mmol/L,Taq酶 0 .75 U(1 U=1 μmol/min) ,d NTP0 .1 5mmol/L,引物 1 6 .5 ng,模板 3 0 ng,明胶 0 .0 0 1 % ,KCl5 0 mmol/L,Tris1 0 mmol/L(p H8.3 )为最佳反应混合物组合。对 Peltier Thermal Cycler 2 0 0而言 ,94℃预变性 5 min,94℃变性 1 min,3 5℃退火 1 min,72℃延伸 2 min,最后 72℃保温 5 min,共计 40个循环为最佳扩增条件 ;对 Perkin ElmerCetus DNA Thermal Cycler- 480而言 ,采用 94℃预变性 3 min后 ,前 3个循环 ,94℃变性 1 min,3 5℃退火 1 min,72℃延伸 2 min,后 3 7个循环 ,94℃变性 3 0 s,3 6℃退火 45 s,72℃延伸 1 min,最后72℃保温 5 min的循环程序可获得理想扩增。并阐述了优化 RAPD实验体系的设计原则。

主 题 词：高梁 胞质雄性不育 保持系 RAPD技术 技术优化 实验设计 

学科分类：09[农学] 0903[农学-动物生产类] 0901[农学-植物生产类] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:1000-274X.2002.03.023

馆 藏 号：203443427...