志贺菌TaqMan-MGB探针实时荧光聚合酶链反应快速检测方法的应用研究

作     者：梅玲玲 朱敏 张俊彦 占利 MEI Ling-ling;ZHU Min;ZHANG Jun-yan;ZHAN Li

作者机构：浙江省疾病预防控制中心微生物检验所浙江杭州310051 

出 版 物：《疾病监测》 (Disease Surveillance)

年 卷 期：2009年第24卷第12期

页      码：910-914页

摘      要：目的建立志贺菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR快速检测技术,为从患者、食品和环境中快速分离和鉴定志贺菌提供技术支撑。方法根据志贺菌ipaH基因序列设计一对特异性引物和TaqMan-MGB探针;通过对PCR扩增体系和反应条件的优化,建立志贺菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR快速检测方法;用添加已知志贺菌浓度的样本验证方法敏感性;用志贺菌标准菌株、分离株以及大肠埃希菌、沙门菌、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌等致病菌验证方法特异性。结果用本研究建立的志贺菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR检测方法检测志贺菌,其Ct值与模板浓度的对数值具有很好的对应关系(Y=-3.93×log(X)+37.34,R=0.999),最低检测浓度为30cfu/ml,3株志贺菌标准株,30株志贺菌分离株检测结果均为阳性;而沙门菌、副溶血性弧菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌等91株其他细菌的Ct值均>35或扩增曲线成一平滑直线。与常规分离鉴定方法比较差异无统计学意义(P>0.05,χ2=0.27)。对于纯菌和食品样品整个检测过程仅需2h和10h。结论志贺菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR检测技术具有特异性强,敏感性高,易操作等优点,有很好的应用前景和研究价值。

主 题 词：志贺菌 实时荧光PCR TaqMan-MGB探针 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.3784/j.issn.1003-9961.2009.12.004

馆 藏 号：203448724...