利用DREAM设计和同源重组进行一步定点突变

作     者：张宝中 冉多良 刘大斌 王盛 张昕 安小平 周育森 童贻刚 ZHANG Bao-zhong;RAN Duo-liang;LIU Da-bin;WANG Sheng;ZHANG Xin;AN Xiao-ping;ZHOU Yu-sen;TONG Yi-gang

作者机构：新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 

基　　金：国家科技支撑计划资助项目(2006BAD06A15) 

出 版 物：《中国生物工程杂志》 (China Biotechnology)

年 卷 期：2008年第28卷第11期

页      码：77-81页

摘      要：目的:建立基于DREAM设计和同源重组的简便、快速定点突变方法。方法:设计两条包含突变的反向PCR(inverse PCR)引物,使其5′端互补从而产生同源重组,同时使用DREAM设计方案在上述引物中引入限制性内切酶位点以便突变子筛选。用能扩增长片段的高保真耐热DNA聚合酶扩增全长的质粒DNA,直接转化大肠杆菌。转化到细菌中的全长质粒DNA PCR产物可利用其末端同源序列发生同源重组而环化。利用引入的酶切位点方便地进行突变子的筛选。结果:用该方法成功地对长度大于7kb的质粒进行了定点突变。结论:本定点突变无需任何突变试剂盒和特殊的试剂,只需一步反应即可完成;利用DREAM设计使克隆筛选简便可靠,高保真耐热DNA聚合酶可保证多数突变子克隆不发生意外突变,而该酶扩增长片段的能力使该方法适合于大多数质粒不经亚克隆直接突变。

主 题 词：定点突变 同源重组 突变子筛选 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.13523/j.cb.20081115

馆 藏 号：203449755...