绵羊IFN-γ和IL-2基因SYBR GreenⅠreal-time PCR检测方法的建立及应用

作     者：张冰冰 赵魁 宋德光 臧德跃 王栋 贺文琦 陈克研 王改丽 高丰 

作者机构：吉林大学畜牧兽医学院吉林长春130062 

基　　金：吉林省科技发展计划重点资助项目(20080217) 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2010年第40卷第11期

页      码：1146-1150页

摘      要：为探讨传染性脓疱病毒感染后机体的细胞免疫应答,从分子水平对传染性脓疱病毒的免疫机制进行了深入探讨。首先针对Th1型细胞因子IFN-γ、IL-2以及管家基因GAPDH的mRNA序列分别设计了1对特异性引物,扩增相应的基因片段并构建含有相应基因序列的重组质粒,以所构建的重组质粒作为阳性标准品,建立了用于IFN-γ、IL-2及GAPDH检测的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法。该方法线性关系良好,IFN-γ、IL-2和GAPDH标准曲线的相关系数均达0.99以上;敏感性高,初始模板的检出下限均达1×103copies/μL;特异性强,扩增产物形成单一的特异性融解峰;重复性好,组内与组间的变异系数均小于3%。应用该方法对传染性脓疱病毒感染羔羊外周血白细胞中的IFN-γ、IL-2 mRNA的表达水平进行了检测。结果表明,建立的real-time PCR检测方法具有灵敏度高、特异性强、重复性好等优点,可用于绵羊Th1型细胞因子的检测及定量分析。

主 题 词：羔羊 Th1型细胞因子 荧光定量聚合酶链反应 检测方法 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.16656/j.issn.1673-4696.2010.11.016

馆 藏 号：203450650...