杧果露水斑病病原菌枝状枝孢霉的巢氏PCR检测方法的建立

作     者：刘晓妹 杨永利 杨石有 张贺 朱朝华 蒲金基 LIU Xiaomei;YANG Yongli;YANG Shiyou;ZHANG He;ZHU Chaohua;PU Jinji

作者机构：海南大学热带农林学院.热带农林生物灾害绿色防控教育部重点实验室海口570228 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所.农业部热带作物有害生物综合治理重点实验室海口571101 

基　　金：海南省自然科学基金(317031) 国家重点研发计划(2017YFD0202100) 海南省高等学校教育教学改革研究项目(Hnjg2016ZD-2 hdjy1606) 

出 版 物：《果树学报》 (Journal of Fruit Science)

年 卷 期：2019年第36卷第1期

页      码：111-118页

摘      要：【目的】杧果露水斑病是当前生产上影响杧果产业的重要病害之一,因潜伏期长常在发病初期不易被察觉而错过防治适期,建立其主要致病菌Cladosporium cladosporioides的快速准确检测方法,对于该病的早期诊断和及时防控尤为重要。【方法】将该病菌的ITS序列与NCBI中的数据大量比对后,在差异位点大的区域设计了8对引物,通过筛选获得两对特异性良好的引物及其扩增条件。【结果】两对特异性引物分别是ML-SF9/ML-SR5和ML-SF10/ML-SR10,扩增条件:94℃4 min;94℃45 s,65℃45 s,72℃1 min,36周;72℃10 min,特异条带大小分别为408 bp和424 bp。为了提高检测的灵敏度,又与真菌通用引物ITS1/ITS4结合后,建立了杧果露水斑病病原菌的两套巢式PCR快速检测体系,可检测病菌DNA的含量最低为3.55×10-9ng·μL-1,比常规PCR灵敏度提高了1万倍,且能实现对潜伏期果实的特异性检测。【结论】此技术操作简单、特异性强、灵敏度高,为杧果露水斑病的早期诊断提供了新方法。

主 题 词：杧果 露水斑病菌 常规PCR 巢式PCR 分子检测 

学科分类：09[农学] 0902[农学-自然保护与环境生态类] 090201[090201] 

核心收录：

D　O　I：10.13925/J.CNKI.GSXB.20180170

馆 藏 号：203453436...