GST pull-down验证新城疫病毒基质蛋白与鸡importinβ1蛋白的相互作用

作     者：胡焱 段志强 嵇辛勤 赵佳福 邓珊珊 李世静 熊建民 HU Yan;DUAN Zhiqiang;JI Xinqin;ZHAO Jiafu;DENG Shanshan;LI Shijing;XIONG Jianmin

作者机构：贵州大学动物科学学院贵阳550025 贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室贵阳550025 贵阳市花溪区农业局贵阳550025 

基　　金：国家自然科学基金(31502074 31760732) 贵州省科技计划项目(黔科合平台人才5788号) 贵州省农业攻关项目(黔科合支撑2588号) 贵州省科学技术基金(黔科合J字2054号) 

出 版 物：《畜牧兽医学报》 (ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA)

年 卷 期：2019年第50卷第1期

页      码：126-133页

摘      要：旨在利用GST pull-down技术验证新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)基质(matrix,M)蛋白与鸡importinβ1蛋白在体外的相互作用。根据NDV ZJ1株M基因和鸡importinβ1基因序列设计引物,通过PCR扩增获得NDV M基因和鸡importinβ1基因,将其分别定向插入到原核表达载体pGEX-6p-1和pET-32a(+)构建重组原核表达载体pGEX-6p-M、pET-32a-importinβ1,然后转化至大肠杆菌BL21(DE3)后进行IPTG诱导表达,SDSPAGE检测重组蛋白的表达情况,并对包涵体重组蛋白进行变性和复性处理。然后以GST-M重组蛋白为诱饵蛋白,His-importinβ1重组蛋白为猎物蛋白,利用GST pull-down技术验证M蛋白与importinβ1蛋白的相互作用。结果表明,成功构建了重组原核表达载体pGEX-6p-M和pET-32a-importinβ1,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)获得了正确表达。SDS-PAGE电泳检测显示GST-M重组蛋白主要以包涵体形式存在,而His-importinβ1重组蛋白以可溶性和包涵体两种形式存在。利用蛋白重折叠试剂盒获得了有活性的GST-M重组蛋白,将其作为诱饵蛋白,可以捕获并检测到His-importinβ1重组蛋白,但是GST标签蛋白不能结合His-importinβ1重组蛋白。利用GST pull-down技术证实了NDV M蛋白与鸡importinβ1蛋白在体外具有直接的相互作用,这为深入研究importinβ1蛋白在NDV M蛋白细胞核定位的分子机制以及在NDV复制和致病中的作用奠定了基础。

主 题 词：新城疫病毒 基质蛋白 importinβ1蛋白 GSTpull-down 蛋白相互作用 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.11843/j.issn.0366-6964.2019.01.015

馆 藏 号：203453597...