嗜水气单胞菌气溶素的表达纯化和活性实验

作     者：董靖 刘永涛 胥宁 杨秋红 杨移斌 艾晓辉 DONG Jing;LIU Yongtao;XU Ning;YANG Qiuhong;YANG Yibin;AI Xiaohui

作者机构：中国水产科学研究院长江水产研究所武汉430223 

基　　金：国家自然科学基金项目(31702368) 

出 版 物：《中国渔业质量与标准》 (Chinese Fishery Quality and Standards)

年 卷 期：2019年第9卷第1期

页      码：27-33页

摘      要：气溶素(AerA)是嗜水气单胞菌分泌的重要毒力因子之一。为开展抗气溶素药物的筛选,本实验设计得到高纯度的气溶素重组蛋白并研究其生物学活性。本实验依据嗜水气单胞菌气溶素基因(aerA)序列设计特异性引物,采用PCR扩增、酶切、连接构建aer A-p GEX-6p-1原核表达载体,经测序验证后将其转化至BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导、亲和层析、离子交换层析纯化,然后进行溶血试验测定其生物学活性。结果表明,当表达温度为16℃,经0. 2 mmol/L IPTG诱导表达16 h后可得到可溶性蛋白,纯化后其纯度大于95%,该蛋白对绵羊红细胞的溶血单位为54. 17 HU/μg。本实验通过原核表达、纯化得到的可溶性重组气溶素蛋白,具有良好的溶血活性,为进一步探究气溶素功能及其应用铺垫基础。

主 题 词：嗜水气单胞菌 气溶素 原核表达 纯化 溶血活性 PCR扩增 分子克隆 

学科分类：0906[农学-水产类] 09[农学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.2095-1833.2019.01.004

馆 藏 号：203453646...