利用CRISPR/Cas9技术构建ALK7^(LoxP/LoxP)小鼠品系

作     者：赵强 刘灯泉 李毅辉 戴红艳 唐梦熊 管军 ZHAO Qiang;LIU Dengquan;LI Yihui;DAI Hongyan;TANG Mengxiong;GUAN Jun

作者机构：青岛大学附属青岛市市立医院心内科山东省青岛市266000 山东大学齐鲁医院重症医学科山东省济南市250012 山东大学齐鲁医院急诊科山东省济南市250012 

基　　金：国家自然科学基金项目(81670411) 

出 版 物：《中国动脉硬化杂志》 (Chinese Journal of Arteriosclerosis)

年 卷 期：2019年第27卷第1期

页      码：69-74页

摘      要：目的利用CRISPR/Cas9技术将LoxP序列靶向导入小鼠活化素受体样激酶7(ALK7)基因,构建ALK7LoxP/LoxP小鼠,与组织特异性Cre小鼠杂交,获得时空特异性ALK7基因敲除小鼠,为研究ALK7在特定时间特定组织中的功能奠定基础。方法利用CRISPR/Cas9技术编辑小鼠ALK7基因:设计合成识别ALK7基因外显子4-6上下游非编码序列的sg RNA。设计并合成LoxP-ALK7-LoxP打靶载体,测序正确后,显微注射法将体外合成的sg RNA、Cas9 m RNA和打靶载体注射到小鼠受精卵,移植受精卵至假孕小鼠输卵管代孕。获得仔鼠后通过PCR、Southern blot鉴定子代小鼠基因型,实时荧光定量PCR、Western blot检测ALK7转录表达水平。结果获得了含有目的基因的打靶阳性小鼠,并且插入的LoxP序列不影响ALK7的转录表达水平。结论利用CRISPR/Cas9技术成功将LoxP序列靶向引入小鼠ALK7基因,成功构建ALK7LoxP/LoxP小鼠品系,为进一步构建组织特异性ALK7基因敲除小鼠模型奠定了基础。

主 题 词：CRISPR/Cas9 活化素受体样激酶7基因 LoxP序列 组织特异性敲除 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 08[工学] 09[农学] 100201[100201] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 10[医学] 

馆 藏 号：203453681...