肿瘤基因靶向治疗载体的构建和鉴定

作     者：钮利喜 陈华伟 李娇 杨斌盛 Niu Lixi;Chen Huawei;Li Jiao;Yang Binsheng

作者机构：山西大学分子科学研究所太原030006 山西大学生物技术研究所太原030006 

基　　金：山西省青年基金资助项目(2011021035-5) 

出 版 物：《医学研究杂志》 (Journal of Medical Research)

年 卷 期：2011年第40卷第10期

页      码：52-55页

摘      要：目的构建并鉴定人端粒酶反转录酶(human telomerase reverse transeriptase,hTERT)基因核心启动子调控的EGFP基因表达载体。方法从体外培养的HepG2细胞中提取全基因组DNA,以此为模板,克隆得到hTERT基因启动子核心区基因片段(hTERTp)。设计引物以质粒pEGFP-N1为模板利用PCR扩增得到EGFP基因片段,将两者通过搭桥PCR扩增得到hTERTp-EGFP片段,经SacⅠ、XbaⅠ双酶切定向插入到pGL3-Enhancer载体中,得到重组表达载体pGL3-hTERTp-EGFP。将该表达载体瞬时转染HELF细胞和HeLa细胞后观察EGFP蛋白表达情况。结果重组质粒经测序后确认插入序列正确无误,瞬时转染48h后在HeLa细胞中可以看到EGFP蛋白的大量表达,而在HELF细胞中未见表达。结论成功构建了可以通过hTERT核心启动子调控治疗基因在肿瘤细胞中特异表达的重组表达载体pGL3-hTERTp-EGFP。

主 题 词：hTERT核心启动子 肿瘤 靶向性 基因治疗 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1673-548X.2011.10.017

馆 藏 号：203457312...