敖汉细毛羊Hoxa5基因质粒的构建及在成纤维细胞中表达量的研究

作     者：张梦瑶 杨峰 刘开东 刘积凤 柳楠 贺建宁 ZHANG Meng-yao;YANG Feng;LIU Kai-dong;LIU Ji-feng;LIU Nan;HE Jian-ning

作者机构：青岛农业大学动物科技学院山东青岛266109 内蒙古农业大学动物科技学院内蒙古呼和浩特010018 青岛畜牧兽医研究所山东青岛266121 

基　　金：国家自然科学基金(31402047) 国家绒毛用羊产业技术体系专项资金(CARS-39-05) 青岛农业大学高层次人才科研基金(631410) 

出 版 物：《中国兽医杂志》 (Chinese Journal of Veterinary Medicine)

年 卷 期：2018年第54卷第10期

页      码：25-29,35页

摘      要：本研究旨在构建敖汉细毛羊Hoxa5基因的质粒及转染成纤维细胞后基因的表达量变化。试验以敖汉细毛羊为研究对象,采集40日龄的胎羊。首先,通过RNA的提取反转录成cDNA参照Gen Bank中Hoxa5基因序列信息设计1对引物,通过PCR反应扩增获得Hoxa5基因片段、将得到的Hoxa5基因连接到pGM-T载体,构建pGM-T-Hoxa5重组质粒并转化大肠杆菌(E. coli) DH5α感受态细胞提取质粒进行酶切鉴定。鉴定正确后构建pcDNA3. 1-Hoxa5重组质粒,转化大肠杆菌(E. coli) DH5α感受态细胞;其次对敖汉细毛羊的成纤维细胞进行分离培养,并将构建的质粒pcDNA3. 1-Hoxa5转染成纤维细胞,利用荧光定量PCR技术和Western Blot技术检测Hoxa5基因在成纤维细胞中表达量的变化。结果显示,经酶切、测序鉴定质粒pcDNA3. 1-Hoxa5构建成功,并且转染成纤维细胞后Hoxa5基因的表达量明显升高,且转染组的表达量显著地高于对照组(P <0. 05)。表明:成功构建了敖汉细毛羊Hoxa5基因的质粒,并且成功转染成纤维细胞,基因在细胞中过表达,结果可为进一步研究其功能奠定基础。

主 题 词：质粒构建 成纤维细胞 Hoxa5质粒转染 RT-PCR Western Blot 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

馆 藏 号：203458048...