人FoxA1 shRNA载体构建与检测

作     者：文俏程 张蔚林 陈志康 曹小霞 陈子华 谭思创 肖献忠 谭斯品 

作者机构：中南大学湘雅医院普外科湖南长沙410008 中南大学湘雅医学院基础医学院病理生理学系湖南长沙410008 中南大学湘雅二医院心胸外科湖南长沙410008 中南大学细胞与分子生物学实验教学中心湖南长沙410008 

基　　金：国家自然科学基金(No:30800550) 湖南省自然科学基金(No:10JJ4016) 

出 版 物：《中国现代医学杂志》 (China Journal of Modern Medicine)

年 卷 期：2014年第24卷第4期

页      码：1-6页

摘      要：目的构建有效的针对人FoxA1基因的shRNA干扰载体,并验证其干扰效果。方法设计合成3对针对人FoxA1基因的和1对无同源性的shRNA片段,将合成的shRNA片段插入到干扰载体pRNAT-U6.1/Neo中,经过酶切和测序验证,成功构建人FoxA1基因的shRNA和空白对照载体。将各干扰载体和空白载体转染人正常胃黏膜上皮细胞(GES-1)和胃癌细胞(SGC-7901),Realtime RT-PCR和Western-blotting检测干扰载体的干扰效率。结果①酶切和测序验证均表明各shRNA载体构建成功。将空载体及各干扰载体分别转染人正常胃黏膜细胞(GES-1)和胃癌细胞(SGC-7901)发现,和空白对照组相比,3组干扰载体能够从mRNA和蛋白表达水平明显抑制FoxA1的表达,但是3组质粒的抑制效率有一定的差异,以3号质粒对Foxa1的干扰效率最强。结论成功构建了三个有效的针对人FoxA1基因的shRNA干扰载体,三组质粒都能有效地抑制FoxA1在GES-1细胞和SGC-7901细胞中的表达。

主 题 词：FoxA1 shRNA载体 干扰效率 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

馆 藏 号：203458491...